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在一個月黑風(fēng)高，凌晨兩點的夜晚，忙得不可開交的你，正準(zhǔn)備審核完最后一個生化報告去休息室打個盹。然而，當(dāng)你看到高大上的生化儀傳過來的結(jié)果時，砸儀器的心都有了。什么鬼？負(fù)值！于是，你不得不打起精神，重做一次。運氣好的話，半個小時能把報告發(fā)出去，運氣不好的話，嘿嘿嘿…… 那么，這個負(fù)值到底是怎么來的呢？ 下面，我來試著解釋下生化項目負(fù)值的結(jié)果是怎么來的，為什么會出現(xiàn)負(fù)值。 上圖是兩點終點法的濃度計算公式，其中定標(biāo)液1一般是0濃度，斜率和截距儀器默認(rèn)一般是1和0（參數(shù)設(shè)置界面有可能做過更改，不是1和0）。那么負(fù)值就自然就來自于前半部分的K（Ax-Ab）。 1、Ab：即S1 Abs，就是我們通常說的試劑空白，不管是常規(guī)標(biāo)本，定標(biāo)還是質(zhì)控測試的結(jié)果都會減去試劑空白。檢驗醫(yī)學(xué)網(wǎng) 2、Ax：也就是參數(shù)界面設(shè)置的兩點間吸光度的差值，具體計算方式如下圖（注意并不是簡單的將兩點的吸光度相減，并且考慮了加入R2之后的稀釋效應(yīng)）： 3、K：我們一般說的K值或K因數(shù)，定標(biāo)之后得到或者手動輸入的，計算公式如下圖： 其中A2的計算方式與上面提到的Ax相同，S1 Abs即試劑空白。檢驗醫(yī)學(xué)網(wǎng) 以上三者都可能是負(fù)數(shù)，都與吸光度有關(guān)，所以凡是會造成吸光度不正常變化的因數(shù)都有可能造成負(fù)值的結(jié)果。 1、燈泡老化或質(zhì)量問題：部分生化分析儀是要求吸光度>19000或750小時需要更換。 2、反應(yīng)杯臟或者損壞：部分生化分析儀是要求與1號反應(yīng)杯的吸光度差值＜±800。 3、清洗針堵塞或者漏氣：反應(yīng)液無法抽走或者無法添加清洗液進(jìn)行清洗；也有的可能會在測試中滴水，反應(yīng)液被稀釋，造成吸光度突然下降，可能出現(xiàn)負(fù)值。檢驗醫(yī)學(xué)網(wǎng) 4、攪拌棒清洗不干凈：攪拌棒有一層特氟龍涂層，如果被刮壞，不易洗干凈，易造成交叉污染。 5、樣品針堵塞：樣品沒有被加入到反應(yīng)杯，沒有發(fā)生反應(yīng)，反應(yīng)曲線是一條直線，吸光度沒有變化，差值為負(fù)，出現(xiàn)負(fù)值。檢驗醫(yī)學(xué)網(wǎng) 6、試劑R1/R2添加錯誤：很多實驗室應(yīng)該都是習(xí)慣于在試劑快用完了時，往試劑瓶里面添加試劑的做法，部分生化分析儀加樣順序是：樣本S+試劑R1+試劑R2，因為主要反應(yīng)物在R2，如果放反了，樣本S和試劑R2直接就開始反應(yīng)，吸光度上升，等試劑R1加入后吸光度下降，吸光度差值為負(fù)，結(jié)果出現(xiàn)負(fù)值。 7、嚴(yán)重脂血或黃疸標(biāo)本：加入樣品S+R1時吸光度就很高，加入R2之后反應(yīng)的吸光度可能還沒有S+R1高，吸光度差值為負(fù)，結(jié)果出現(xiàn)負(fù)值。 8、長時間未定標(biāo)或未做試劑空白：試劑使用時間太長被污染或變質(zhì)，試劑空白吸光度升高很多，等到你下次更換一瓶新試劑的時候，未定標(biāo)或未做試劑空白，使用的還是被污染之后的定標(biāo)和試劑空白結(jié)果，可能出現(xiàn)負(fù)值（見過超過一年沒有定標(biāo)，沒有做試劑空白的）。檢驗醫(yī)學(xué)網(wǎng) 9、底物耗盡：通俗的講就是，濃度太高，試劑里面的反應(yīng)物不夠用了，造成吸光度異常下降或上升。一般酶類項目會出現(xiàn)這樣的情況，可采取稀釋重做。 如果你說上面又是公式又是反應(yīng)曲線的，太復(fù)雜了，我都不懂咋辦？那么你可以考慮試試采取以下方式處理： 1、查看標(biāo)本是否脂血，如果是嚴(yán)重脂血標(biāo)本試試高速離心后再檢測或讓患者清淡飲食幾天后再抽血檢測。檢驗醫(yī)學(xué)網(wǎng) 2、檢查試劑瓶R1/R2有沒有放反。 3、考慮試劑R1/R2添加錯誤，實際操作中這種情況可能性較大，可將R1/R2整瓶更換之后重新測試看看（反應(yīng)曲線會有所表現(xiàn)，如果不會看的話直接換掉試試，注意是連瓶子一起換掉?。?。 4、如果是酶類項目或者速率法的項目出現(xiàn)負(fù)值或異常偏低的情況，考慮底物耗盡，可稀釋重測（反應(yīng)曲線也可以看得出來）。 5、試劑連帶瓶子一起換掉，重新定標(biāo)、做試劑空白，做質(zhì)控再測標(biāo)本（一般來講，可解決相當(dāng)大的一部分結(jié)果問題，也比較容易操作）。 6、特別說下總膽紅素和直接膽紅素，這兩個可能是負(fù)值出現(xiàn)頻率較高的項目，因為他們反應(yīng)的吸光度變化比較小，一般也就幾百的吸光度變化。 除了要注意樣本、定標(biāo)品、質(zhì)控品的避光以及試劑空白之外，建議定標(biāo)的時候增加一個0濃度，也就是采用兩點定標(biāo)，一般采用的是單點定標(biāo)，默認(rèn)0濃度的時候吸光度為0通過原點，但有時候其實不是的，對膽紅素這種反應(yīng)度比較低的項目還是有影響的。 部分生化分析儀的原裝膽紅素試劑，結(jié)果應(yīng)該會比較好一些，專門設(shè)置了通道測定樣本的吸光度，反應(yīng)的吸光度會減掉樣本的吸光度再進(jìn)行計算。 7、拿起你手中的電話，騷擾負(fù)責(zé)你們儀器或試劑的廠家工程師，哈哈……檢驗醫(yī)學(xué)網(wǎng) 【參考文獻(xiàn)】 1)D_P_Module-Photometric_Principles,COBI-CD · Version 2.0,Roche diagnostics 2)D_P_Module-Photometric_Calibration, COBI-CD · Version 2.0,Roche diagnostics 來源：檢驗視界網(wǎng)微信公眾號，已獲授權(quán)轉(zhuǎn)載 |
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