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01 負值產(chǎn)生的原因 首先我們要知道生化檢驗結(jié)果是如何得到的，以CRE為例。 CRE在15、16點吸光度的均值為A1， 在33、34點吸光度的均值為A2，那么CRE的吸光度AX=A2-A1。  然后將Ax代入標準曲線中就可得到CRE濃度Cx。 計算公式為：Cx={K*(AX-B)+C1}*IFA+IFB  STD（1）：空白液 （第一標液） STD（2）：標準液 （第二標液） K為標準曲線斜率；FA+IFB為儀器常數(shù)；C1一般為0。因此濃度計算公式可以簡化為：Cx=K*(AX-B)； 然后由公式及AX=A2-A1就可以得出負值的原因：AX-B＜0或A2-A1＜0。 當AX-B＜0表示檢測項目的吸光度小于空白吸光度；一般為檢測系統(tǒng)出現(xiàn)問題導(dǎo)致杯空白過高。 當Ax＜0表示試劑原因或標本原因，導(dǎo)致反應(yīng)向相反方向進行。 02 出現(xiàn)負值怎么辦？ 經(jīng)過上面的分析我可看出，導(dǎo)致負值的原因有以下3點： 1、標本原因：這種情況只導(dǎo)致某一份檢測結(jié)果出現(xiàn)負值。 2、試劑原因：這種情況導(dǎo)致多份檢測結(jié)果中某一檢測項目出現(xiàn)負值 3、檢測系統(tǒng)原因：這種情況導(dǎo)致多份檢測結(jié)果中多個檢測項目出現(xiàn)負值 可以按照以下步驟進行處理： 1、查看標本是否脂血，如果是嚴重脂血標本試試高速離心后再檢測或讓患者清淡飲食幾天后再抽血檢測。檢驗醫(yī)學(xué)網(wǎng) 2、檢查試劑瓶R1/R2有沒有放反。 3、考慮試劑R1/R2添加錯誤，實際操作中這種情況可能性較大，可將R1/R2整瓶更換之后重新測試看看（反應(yīng)曲線會有所表現(xiàn)，如果不會看的話直接換掉試試，注意是連瓶子一起換掉?。?/p> 4、如果是酶類項目或者速率法的項目出現(xiàn)負值或異常偏低的情況，考慮底物耗盡，可稀釋重測（反應(yīng)曲線也可以看得出來）。 5、試劑連帶瓶子一起換掉，重新定標、做試劑空白，做質(zhì)控再測標本（一般來講，可解決相當大的一部分結(jié)果問題，也比較容易操作）。 6、特別說下總膽紅素和直接膽紅素，這兩個可能是負值出現(xiàn)頻率較高的項目，因為他們反應(yīng)的吸光度變化比較小，一般也就幾百的吸光度變化。 除了要注意樣本、定標品、質(zhì)控品的避光以及試劑空白之外，建議定標的時候增加一個0濃度，也就是采用兩點定標，一般采用的是單點定標，默認0濃度的時候吸光度為0通過原點，但有時候其實不是的，對膽紅素這種反應(yīng)度比較低的項目還是有影響的。 部分生化分析儀的原裝膽紅素試劑，結(jié)果應(yīng)該會比較好一些，專門設(shè)置了通道測定樣本的吸光度，反應(yīng)的吸光度會減掉樣本的吸光度再進行計算。 7、與儀器或試劑的廠家工程師聯(lián)系，尋求幫助。 03 影響生化檢驗結(jié)果的主要因素 1、燈泡老化或質(zhì)量問題： 部分生化分析儀是要求吸光度>19000或750小時需要更換。 2、反應(yīng)杯臟或者損壞： 部分生化分析儀是要求與1號反應(yīng)杯的吸光度差值＜±800。 3、清洗針堵塞或者漏氣： 反應(yīng)液無法抽走或者無法添加清洗液進行清洗；也有的可能會在測試中滴水，反應(yīng)液被稀釋，造成吸光度突然下降，可能出現(xiàn)負值。檢驗醫(yī)學(xué)網(wǎng) 4、攪拌棒清洗不干凈： 攪拌棒有一層特氟龍涂層，如果被刮壞，不易洗干凈，易造成交叉污染。 5、樣品針堵塞： 樣品沒有被加入到反應(yīng)杯，沒有發(fā)生反應(yīng)，反應(yīng)曲線是一條直線，吸光度沒有變化，差值為負，出現(xiàn)負值。檢驗醫(yī)學(xué)網(wǎng) 6、試劑R1/R2添加錯誤： 很多實驗室應(yīng)該都是習(xí)慣于在試劑快用完了時，往試劑瓶里面添加試劑的做法，部分生化分析儀加樣順序是：樣本S+試劑R1+試劑R2，因為主要反應(yīng)物在R2，如果放反了，樣本S和試劑R2直接就開始反應(yīng)，吸光度上升，等試劑R1加入后吸光度下降，吸光度差值為負，結(jié)果出現(xiàn)負值。 7、嚴重脂血或黃疸標本： 加入樣品S+R1時吸光度就很高，加入R2之后反應(yīng)的吸光度可能還沒有S+R1高，吸光度差值為負，結(jié)果出現(xiàn)負值。 8、長時間未定標或未做試劑空白： 試劑使用時間太長被污染或變質(zhì)，試劑空白吸光度升高很多，等到你下次更換一瓶新試劑的時候，未定標或未做試劑空白，使用的還是被污染之后的定標和試劑空白結(jié)果，可能出現(xiàn)負值（見過超過一年沒有定標，沒有做試劑空白的）。檢驗醫(yī)學(xué)網(wǎng) 9、底物耗盡： 通俗的講就是，濃度太高，試劑里面的反應(yīng)物不夠用了，造成吸光度異常下降或上升。一般酶類項目會出現(xiàn)這樣的情況，可采取稀釋重做。 04 實戰(zhàn)案例分析 進一步分析，查看AU5831檢測結(jié)果為負值的標本，調(diào)取反應(yīng)曲線，如圖1，圖2，正常反應(yīng)曲線如圖3。    LP（a）檢測方法為兩點終點法，反應(yīng)監(jiān)測12,27兩點吸光度，與正常反應(yīng)曲線對照，可見結(jié)果異常的曲線中，加入試劑2（R2）后吸光度出現(xiàn)不穩(wěn)定的變化，可出現(xiàn)1-2個小峰，當反應(yīng)達到平衡，27點的吸光度值若小于12點吸光度值，則檢測結(jié)果可出現(xiàn)負值，由此考慮反應(yīng)體系中是否存在干擾因素。 如我們此前案例報道的，因日常工作中常需檢測腎內(nèi)血透患者標本，此類血液標本離體后的凝集過程較緩慢，需幾十分鐘甚至更長的時間，常表現(xiàn)為反復(fù)離心反復(fù)血清凝集的現(xiàn)象，故檢測過程中較易產(chǎn)生凝塊，長期積累有時可粘附杯壁，較難清洗，且易堵塞清洗比色系統(tǒng)的抽取廢液的探針或管路。另一方面，生化管中存在分離膠，離心不當有時可造成溶膠，凝膠亦可粘附杯壁及造成抽取廢液的探針或管路堵塞。遂首先觀察比色杯是否異常，查看檢測結(jié)果為負值的LP（a）所使用的比色杯，比較同一比色杯檢測的不同項目是否出現(xiàn)相同的曲線異常，如圖4，圖5，圖6。   如上圖，通過比較可見，同樣使用201號比色杯，LP（a）曲線異常，而ALP和CHO曲線正常，其他比色杯亦只有LP（a）檢測異常，由此可排除比色杯因素造成檢測結(jié)果為負值。 既然不是比色杯異常影響比色，則進一步分析考慮是否為光源不穩(wěn)定產(chǎn)生干擾。LP（a）檢測為單波長，所用波長為600nm，故重點觀察600nm附近檢測波長的項目，通過比較可知，TG（如圖5），主波長為660nm，CHO（如圖6），主波長為540nm，兩者反應(yīng)曲線平滑，且其他波長（如340nm等）處的檢測項目均未見異常，由此排除光源不穩(wěn)定造成的檢測結(jié)果為負值。 排除以上標本及儀器因素的干擾，明確僅有LP（a）一個項目結(jié)果異常后，接下來則考慮試劑因素。從異常的反應(yīng)曲線可見，試劑1加入后曲線無異常，而加入R2后，吸光度出現(xiàn)不穩(wěn)定變化，故推測干擾來自R2試劑，疑R2試劑被污染，于是將R2試劑全部更換，隨后進行校準，質(zhì)控，室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果在控，反應(yīng)曲線如圖7。 更換試劑后，將檢測結(jié)果異常的標本重新檢測，反應(yīng)曲線恢復(fù)正常，結(jié)果為正值。 生化檢驗中項目的檢測干擾因素眾多，當檢測結(jié)果出現(xiàn)異常時，如何對問題進行分析處理是每個生化檢驗人員應(yīng)具備的能力。反應(yīng)曲線作為生化反應(yīng)過程的直觀反映，當遇到問題時，我們可以通過分析曲線，查找檢測過程中誤差、失控產(chǎn)生的原因，從而有針對性地找到解決問題的方法，使儀器盡快恢復(fù)正常工作。 資料來源：基層檢驗醫(yī)學(xué)網(wǎng)、妙畢生化、檢驗視界網(wǎng)、臨床檢驗醫(yī)學(xué) |
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