大家做實(shí)驗(yàn)，經(jīng)常要用到抗體，但是往往不知怎么選抗體，買(mǎi)到不好用的抗體，浪費(fèi)錢(qián)不說(shuō)還耽誤時(shí)間。其實(shí)挑選抗體還是有些竅門(mén)和小“秘密”的，今天Dr. T就給大家分享一些。先說(shuō)清楚，會(huì)提及一些公司名字，但Dr. T可沒(méi)有收任何廣告費(fèi)，還擔(dān)著造謠的責(zé)任，大家不相信就轉(zhuǎn)發(fā)500次試試吧！
挑選抗體首先看清楚此抗體能用于什么。一是能不能用于咱要做的實(shí)驗(yàn)類(lèi)型，不同廠家標(biāo)注縮寫(xiě)不同，但大體看一眼大家都懂，比如W或WB都是指Western blot，E指ELISA，還有IHC、IP、IF。不廢話，只是有一點(diǎn)，萬(wàn)一找不到對(duì)應(yīng)的抗體怎么辦？沒(méi)辦法，只有賭一賭了。沒(méi)標(biāo)識(shí)只是代表廠家沒(méi)驗(yàn)證，不表示一定不行。二是能不能用于要檢測(cè)的物種（H、M、Rat等），不多解釋?zhuān)@些大部分人都應(yīng)該清楚，但萬(wàn)一也沒(méi)有怎么辦？
接下來(lái)呢，就是記住幾點(diǎn)好：
1.物種越遠(yuǎn)越好
物種越遠(yuǎn)，蛋白質(zhì)相似形性就越低，免疫識(shí)別就越容易，產(chǎn)生的抗體效價(jià)和特異性就越高。比如要檢測(cè)human的蛋白質(zhì)，那Chicken>Goat>Rabbit>Rat>mouse（“>”表示優(yōu)于）。這也是為什么兔單抗出來(lái)后，很多情況下比鼠單抗好用（對(duì)于檢測(cè)到是human的蛋白質(zhì)來(lái)講）的原因——物種更遠(yuǎn)了。兔單抗雖然看似貴些，稀釋比可能是1：2000，鼠單抗則大多是1：200左右，實(shí)際用起來(lái)，哪個(gè)才是真便宜，你懂的。
2.儲(chǔ)存條件-20°C的比4°C的好
一般4°C保存的抗體，保質(zhì)期說(shuō)是多久（半年或者一年），基本就是那么久，甚至?xí)r間沒(méi)過(guò)保質(zhì)期也明顯變差了，-20°C的抗體保質(zhì)期說(shuō)明書(shū)上可能只說(shuō)一年，但實(shí)際上常常放上兩三年也仍好用。但各位看官前面別聽(tīng)了我的話把說(shuō)明書(shū)寫(xiě)4°C保存的抗體放到-20°C去！凡是標(biāo)識(shí)為-20°C保存的抗體儲(chǔ)存液（Storage buffer）都是添加了40%～50%的Glycerol。干嘛的？就是防凍劑。有了它-20°C就不會(huì)凍起來(lái)，沒(méi)它可就難保了。抗體也是蛋白質(zhì)，凍融一次就對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)破壞一次，沒(méi)看見(jiàn)說(shuō)明書(shū)上都寫(xiě)著Avoid freeze / thaw cycle嗎！
3.儲(chǔ)存有BSA的比沒(méi)有的好
BSA——牛血清白蛋白。有什么用？蛋白質(zhì)保護(hù)劑。一般BSA濃度為1%，在儲(chǔ)存液中的含量遠(yuǎn)比抗體本身高，萬(wàn)一不小心混入了蛋白酶，先降解的也是BSA。因此有BSA的就更穩(wěn)定、更耐降解一些。同時(shí)有了BSA，比單純只有抗體這一種蛋白質(zhì)時(shí)，抗體更不容易聚集、變性，也能起到一定程度的抗體穩(wěn)定作用——這兩者在血液里本來(lái)就是伙伴。
4.有圖的比沒(méi)圖的好
不管是WB還是IHC還是IF等，有圖的說(shuō)明驗(yàn)證過(guò)，而且結(jié)果還不錯(cuò)，沒(méi)圖的不是沒(méi)驗(yàn)證過(guò)，就是太難看不好意思放上去。但是圖里也有貓膩，我們下一集里再悄悄說(shuō)。
5.多抗比單抗好
這里“好”的意思是指適用性更廣泛，效價(jià)更高，簡(jiǎn)而言之就是不容易碰到不好用的。為啥呢？多抗，顧名思義是由很多種克隆的抗體組成的復(fù)合物，不同的克隆識(shí)別的表位不一樣，組合在一起就像是霰彈槍?zhuān)挥迷趺疵闇?zhǔn)也能打到，而單抗就是步槍?zhuān)虿恢芯椭挥性倜闇?zhǔn)再打了（換另外的單克隆抗體）。因?yàn)閱慰贯槍?duì)的唯一個(gè)抗原表位，抗體結(jié)構(gòu)也是一樣，如果這表位在咱要做的體系里碰巧有糖基化、乙?；?、磷酸化等等修飾，或者因?yàn)椴煌郫B方式的關(guān)系，表位被遮蔽甚至常在深處，單抗結(jié)合就會(huì)受到影響。所以大家留心看同一個(gè)蛋白質(zhì)的多抗的稀釋比，常常要高出單抗很多。不過(guò)對(duì)于抗體生產(chǎn)商來(lái)講，單抗的質(zhì)量更易控制，也易于生產(chǎn)規(guī)模的放大，導(dǎo)致他們更希望生產(chǎn)/賣(mài)單抗。另外，對(duì)于ELISA這樣的定量實(shí)驗(yàn)，單抗穩(wěn)定性重復(fù)性更好。因此抗體廠商不斷努力去篩選適用范圍廣、特異性好、效價(jià)高的單抗，慢慢的，好的單抗也多起來(lái)了，比如CST的XP?，Abcam的RabMAb?，Sigma的Prestige Antibodies?金標(biāo)抗體中的單抗就還不錯(cuò)，這些百里挑一，經(jīng)多種驗(yàn)證的單抗效能接近多抗，有的還超過(guò)多抗，就不是普通步槍?zhuān)蔷褤舨綐屃耍新示透吡?。（沒(méi)提到的勿怪，反正Dr.T沒(méi)收任何廣告費(fèi)，想起什么說(shuō)什么，一時(shí)沒(méi)想起的，那也沒(méi)辦法了。
6.大公司的比小公司的好
唉～其實(shí)主要就是外國(guó)品牌的比國(guó)產(chǎn)的好，我沒(méi)有那樣說(shuō)，因?yàn)槲沂侵袊?guó)人?？赡懿簧倏垂僦溃芏嗤鈬?guó)品牌的抗體其實(shí)都是中國(guó)廠家生產(chǎn)，然后出去貼個(gè)牌又賣(mài)回中國(guó)而已，不過(guò)外國(guó)大品牌在質(zhì)控上面做的確實(shí)要好一些。而一些小廠的不是抗體本身不好，而是質(zhì)控做得不好，所以不同批次性能差別較大。但慢慢的我發(fā)現(xiàn)國(guó)產(chǎn)品牌越來(lái)越重視質(zhì)控了，還有些國(guó)產(chǎn)品牌做的很好，結(jié)果被外國(guó)大公司給收購(gòu)了。
7.文獻(xiàn)越多的越好
好些抗體公司會(huì)把引用此抗體的參考文獻(xiàn)放在網(wǎng)頁(yè)上去，哪個(gè)引用的多，自然驗(yàn)證過(guò)的人多，就會(huì)更可靠些?；蛘咦约簩⒇浱?hào)輸入谷歌學(xué)術(shù)去檢索一下，出來(lái)的文章越多，就越靠譜，謹(jǐn)慎點(diǎn)的看官還可以點(diǎn)進(jìn)去看看文獻(xiàn)做的應(yīng)用是不是自己要做的那種。有的公司還在商品頁(yè)面開(kāi)了評(píng)論/論壇功能，用戶可以留言，弄得像某寶、某東一樣，挺好的。
8.重點(diǎn)在圖
“微信朋友圈”常常戲謔重點(diǎn)在文字，因?yàn)榇蠹叶紣?ài)看圖，確實(shí)，圖傳遞信息更快更有效，而且我們還可以從抗體實(shí)驗(yàn)展示圖中看出一些秘密。第一集第4點(diǎn)說(shuō)過(guò)，有圖比沒(méi)圖的好，是指如果抗體說(shuō)明里展示了相關(guān)的實(shí)驗(yàn)圖片，就比較容易評(píng)估這個(gè)抗體怎么樣。IHC、IF等圖比較簡(jiǎn)單，WB的圖就有很多“貓膩”要注意看了。
1）注意看上樣樣品是否是重組蛋白（即外源過(guò)表達(dá)的蛋白質(zhì)，全長(zhǎng)或者部分）。外源過(guò)表達(dá)蛋白質(zhì)的量常常比內(nèi)源表達(dá)的多很多，可能圖上面外源過(guò)表達(dá)的檢測(cè)出來(lái)?xiàng)l帶很清晰、很純，但是真正檢測(cè)內(nèi)源蛋白的時(shí)候，這抗體的靈敏度或特異性可能就未必好了。而且Dr.T猜測(cè)，多半是內(nèi)源的檢測(cè)不到或者效果不好，所以只有放一個(gè)外源的檢測(cè)圖上來(lái)。下圖左邊是外源的，右邊是內(nèi)源的，最好挑右邊這種哦（雖然右邊的條帶不好看）！有的圖并沒(méi)寫(xiě)清楚樣品是什么，那注意看一下條帶大小，與內(nèi)源的預(yù)測(cè)大小差很多的可能就是重組蛋白。
2）圖一樣的，本質(zhì)上就是同一個(gè)抗體。大家有沒(méi)有碰到過(guò)去不同公司網(wǎng)頁(yè)上找抗體，發(fā)現(xiàn)兩個(gè)公司的抗體的實(shí)驗(yàn)展示圖是一模一樣的，有木有？嘿嘿，其實(shí)這就是同一種抗體，不少所謂大公司，只是貼牌商，采購(gòu)的小公司的抗體貼上自己的牌子。那這時(shí)候，哪個(gè)快、哪個(gè)便宜、選哪個(gè)就看你了，你懂的！
