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(1) 石蠟切片脫蠟至水。
(2) 3%H2O2室溫孵育5~10分鐘，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。
(3) 蒸餾水沖洗，PBS浸泡5分鐘，(如需采用抗原修復(fù)，可在此步后進行)。
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(4) 5~10%正常山羊血清(PBS 稀釋)封閉，室溫孵育10分鐘。傾去血清，勿洗，滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗或一抗工作液，37℃孵育1~2小時或4℃過夜。
(5) PBS沖洗，5分鐘×3次。
滴加適當(dāng)比例稀釋的生物素標(biāo)記二抗(1%BSA-PBS 稀釋)，37℃孵育10~30 分鐘;或滴加第二代生物素標(biāo)記二抗工作液，37℃或室溫孵育10~30 分鐘。
(6) PBS沖洗，5分鐘×3次。
滴加適當(dāng)比例稀釋的辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素(PBS 稀釋)，37℃孵育10~30 分鐘;或第二代辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液，37℃或室溫孵育10~30 分鐘。
(7) PBS 沖洗，5 分鐘×3 次。
顯色劑顯色(DAB 或AEC)。自來水充分沖洗，復(fù)染，封片。
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