 用于含有伯氨基（NH2-）的蛋白/抗體/多肽或者其他大分子的標(biāo)記。本生物素通過其反應(yīng)原理如下:
產(chǎn)品特點(diǎn)： l 延長(zhǎng)了生物素的連接臂,更少地減少空間位阻,也可以適合于細(xì)胞的表面標(biāo)記; l 使用方法簡(jiǎn)單，無需額外準(zhǔn)備試劑； l 節(jié)約時(shí)間，整個(gè)過程僅需 90min； l 通過離心脫鹽和去除游離的生物素,無需透析或者凝膠過濾； 超級(jí)生物素標(biāo)記使用量的計(jì)算：每個(gè)反應(yīng)中生物素試劑的使用量取決于待標(biāo)記蛋白質(zhì)的量和濃度。例如,通過我們實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析表明,標(biāo)記2mg/ml 的抗體（IgG ，150KD），使用生物素和抗體的分子比為 20:1 能達(dá)到最佳效果;其他蛋白的標(biāo)記可以根據(jù)實(shí)際情況,參照此比例類推。 計(jì)算公式如下：
其中：V(μL)為生物素的體積； V1(mL)為待標(biāo)記物（蛋白/抗體/其他含有伯胺-NH2的大分子）； C1(mg/mL)為待標(biāo)記物的濃度； R 為生物素與待標(biāo)記物的分子比例； M為待標(biāo)記物的分子量（道爾頓，Dalton，Da） C(mM)為生物素的濃度 計(jì)算示例：我們將生物素配置成10mM的濃度，用來標(biāo)記1mL 的2mg/ml 的抗體（IgG ，150KD）,準(zhǔn)備加入的生物素與抗體的比例為20:1，那么帶入公式計(jì)算
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備： 1.仔細(xì)閱讀使用說明書。 2.按照生物素標(biāo)記使用量的計(jì)算的公式計(jì)算所需要的生物素的量。 3.提前 20min 從冰箱中取出試劑盒，使試劑盒各組分平衡至室溫。 4.用助溶劑DMSO將活性超級(jí)生物素配制成10mM(2mg超級(jí)生物素加DMSO 440ul) 特別提示： A. 溶解的活性生物素最好一次性使用完，如果使用不完可以密封放在-20℃的冰箱內(nèi)，一月內(nèi)可以使用，但是標(biāo)記效率會(huì)降低； B. 生物素助溶劑使用完之后需要立即密封保存，防止吸潮。 操作步驟：（本操作步驟按照 1mg抗體的量進(jìn)行標(biāo)記） 1.取1mg 待標(biāo)記抗體于超濾管中，并加入不超過超濾管最大體積的標(biāo)記緩沖液，12,000g 離心 10min；可以重復(fù)此步驟多次；最后一次超濾完成，可以加入適量標(biāo)記緩沖液調(diào)整抗體的濃度到2mg/mL左右； 請(qǐng)注意： A.超濾管的最大體積和最大截留分子量，本實(shí)例超濾管的最大體積為 0.5mL； B.如果待標(biāo)記抗體濃度低時(shí)，可先超濾離心濃縮； C.如果待標(biāo)記物含有游離的氨基（Tris,氨基酸或者其他干擾物，需要用標(biāo)記緩沖液反復(fù)超濾確保其去除干凈） 2. 加入13.3μL溶解的活性超級(jí)生物素至上述超濾管中，并輕輕吹打混勻。放入 37℃恒溫箱中避光溫育 30min。 3. 12,000 x g 離心 10min。 4. 加入適量標(biāo)記緩沖液至上述超濾管中，并輕輕吹打混勻，12,000g 離心 10min， 重復(fù)此步驟多次。 5. 收集超濾管中的溶液（即生物素標(biāo)記的抗體），加入等體積保存液，-20℃保存。 注意事項(xiàng)： 1.本試劑盒適用于所有含有伯氨基（NH2-）的大分子物質(zhì)的標(biāo)記，（蛋白，抗體，以及其他含有伯氨基（NH2-）的化合物分子），具體標(biāo)記比例根據(jù)待標(biāo)記物中氨基的數(shù)量確定； 2.本試劑盒中的生物素助溶劑為DMSO ，使用完畢后要密封干燥保存； 3.本試劑盒配備了標(biāo)記物保存液，實(shí)驗(yàn)人員也可以根據(jù)被標(biāo)記物的特點(diǎn)不同，選擇更適合的保存液。 4.本試劑盒未開封前的有效期為18個(gè)月，請(qǐng)?jiān)谟行趦?nèi)使用。 5.本系列試劑盒提供的為超濾管分為不同的截留分子量和不同的最大容積，客戶需要根據(jù)自己要標(biāo)記的物質(zhì)的分子量大小和標(biāo)記量選擇適合的型號(hào)。 |
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