目前PCR應用已得到長足的發(fā)展，已成為疫病診斷，疫情控制等方面的有力工具，為了避免在PCR方法中出現(xiàn)污染及出現(xiàn)假陽性和假陰性結果等現(xiàn)象，保證結果的準確性，在實驗室環(huán)境安全控制上嚴格做到實驗室獨立區(qū)域設計，功能分區(qū)明確，保證實驗室潔凈環(huán)境，人流物流嚴格分流，設計合理的壓力梯度，形成有序的氣流組織方向，切實做到避免交叉污染。

PCR是聚合酶鏈式反應（PolymeraseChainReaction）的簡稱，是一種分子生物學技術，用于放大特定的DNA片段，可看作生物體外的特殊DNA復制。

避免污染是PCR實驗室設計建設首要考慮重點

由于PCR技術的高度敏感性，PCR技術要求高、影響因素多，從樣品制備到結果的產(chǎn)生，任何一處細微的失誤均會造成結果的偏差，導致樣品的假陽性和假陰性結果。

PCR實驗室研究過程中，很多操作都會產(chǎn)生氣溶膠，比如離心、混勻等操作閔。為保證環(huán)境安全，PCR實驗室設計建設需獨立區(qū)域設計，避免與其余環(huán)境的交叉混雜，下面SICOLAB根據(jù)我們做過的工程實例從平面布局、凈化區(qū)域劃分，人物流設計和壓差控制等方面具體介紹。

一、標準規(guī)范

《實驗室生物安全通用要求》國家標準GB19489-2008

《臨床基因擴增檢驗實驗室工作規(guī)范》衛(wèi)醫(yī)發(fā)[2002]8號文

《臨床基因擴增檢驗實驗室管理暫行辦法》衛(wèi)醫(yī)發(fā)[2002]10號文

《臨床基因擴增檢驗實驗室設計標準》衛(wèi)醫(yī)發(fā)[2002]10號文附件

《基因檢驗實驗室技術要求》國家質(zhì)監(jiān)檢驗總局SN/T1193-2003

《潔凈室及相關受控環(huán)境-生物污染控制》國際標準ISO14698

《潔凈廠房設計規(guī)范》國家標準GB500732013

《潔凈室施工及驗收規(guī)范》GB50591-2010

《室內(nèi)空氣質(zhì)量標準》國家標準GB/T18832002

《生物安全實驗室建筑技術規(guī)范》國家標準GB50346-2011《病原微生物實驗室生物安全管理條例》衛(wèi)生部(2004-11-12)

 二、PCR實驗室區(qū)域劃分

1、功能劃分

試劑準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增反應一區(qū)、純化區(qū)、擴增反應二區(qū)、后純化區(qū)（如上布局圖）。

2、SICOLAB設計原則

按國家衛(wèi)生部的要求，各實驗區(qū)域必須是相互獨立的，不能直通，每個獨立實驗區(qū)設有專門的閘間供工作人員換工作服和鞋，進入各工作區(qū)域必須嚴格遵循單一方向順序，即只能從左邊試劑準備區(qū)，標本制備區(qū)，擴增反應一區(qū)，純化區(qū)，擴增反應二區(qū)到后純化區(qū)，避免發(fā)生交叉污染。

3、為避免樣本間的交叉污染，房間采取凈化控制，總體設計為10萬級。閘間（緩沖間）設計為正壓區(qū)，保證與外界環(huán)境隔離，避免從鄰近區(qū)域進入本區(qū)域的氣溶膠污染。

三、氣流設計

人流物流設計各行其道，避免交叉混雜，整個區(qū)域設計一個公用走廊，工作區(qū)域之間設計試劑物品傳遞專用窗，做到人物分流。

1、物流：在試劑準備區(qū)與標本制備區(qū)、標本制備區(qū)與PCR擴增區(qū)之間，以及擴增區(qū)域和純化區(qū)之間設計有電子連鎖不銹鋼傳遞窗，以單向進行試劑、標本等物品傳送，配制的試劑通過單向傳遞窗由試劑準備區(qū)傳遞到標本制備區(qū)，處理過的標本通過單向傳遞窗由標本制備區(qū)傳遞到PCR擴增區(qū)，按照工藝流程逐次傳遞，避免返流。單向物品傳送系統(tǒng)既保障了標本試劑不受污染，又保障了標本試劑不污染環(huán)境。

2、人流：人員通過閘間分別進入各自實驗區(qū)域，進出各實驗區(qū)域需要在閘間區(qū)域更換潔凈工作服，手消毒等。

三、壓差設計

PCR實驗室應設計為負壓潔凈室，通過壓差控制，使整個PCR實驗過程中試劑和標本免受氣溶膠的污染，并且降低擴增產(chǎn)物對人員和環(huán)境的污染。

各個實驗室與非潔凈區(qū)之間的閘間保持正壓，＞10Pa，實驗與閘間之間的氣流組織方向為：試劑準備區(qū)空氣流向閘間，標本制備區(qū)流向閘間，而PCR擴增區(qū)氣流方向由閘間流向PCR擴增區(qū)，純化區(qū)同理；

同時按照試劑單向流方向，各個實驗室之間設計不同壓力梯度來實現(xiàn)單向氣流組織方向，由試劑準備區(qū)（+20Pa）、標本制備區(qū)（+15Pa）、擴增反應一區(qū)（-5Pa）、純化區(qū)（-10Pa）、擴增反應二區(qū)（-20Pa）、到后純化區(qū)（-25Pa）壓力逐漸降低，形成單向負壓壓力梯度。

四、其它安全設施

PCR實驗室為潔凈空調(diào)系統(tǒng)，系統(tǒng)形式采用直流系統(tǒng)不回風，防止交叉污染；試劑準備間設計超凈臺，保證試劑免受空氣環(huán)境污染；標本制備間設計生物安全柜，保證標本不污染室內(nèi)環(huán)境，并保證標本免受環(huán)境污染。

以上為SICOLAB整理。