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[目的]制備一種人抗PD-L1抗體,建立其酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)的檢測方法。[方法]將表達抗體重鏈和輕鏈的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到HEK-293細胞制備抗體,并建立ELISA方法對抗體進行檢測。[結(jié)果]間接ELISA法的最佳抗原包被濃度為0.25μg/mL,抗PD-L1抗體標(biāo)準品的起始濃度為0.25μg/mL,最適封閉液濃度為2%BSA,最適封閉時間為2 h,二抗的最佳稀釋度為1∶4 000。細胞上清中的抗PD-L1抗體樣品1的滴度為125,濃度66.66 ng/mL,靈敏度為6.3 ng/mL;樣品2的滴度為125,濃度為81.8 ng/mL,靈敏度為5.9 ng/mL。[結(jié)論]建立了一種人抗PD-L1單克隆抗體的間接ELISA檢測方法,經(jīng)對樣品1和樣品2的批內(nèi)批間重復(fù)性試驗統(tǒng)計分析,變異系數(shù)均<10%,該ELISA法適用于該抗體的檢測。……
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