研究人員一開始就測(cè)試干了細(xì)胞研究中一些新建立的細(xì)胞培養(yǎng)補(bǔ)充劑或生物力學(xué)原理是否有助于應(yīng)對(duì)這一挑戰(zhàn)(例如，壓力控制、補(bǔ)充劑、合成血清等）。而且在轉(zhuǎn)鼓上使用了“滾筒培養(yǎng)系統(tǒng)”，并將其與定制的內(nèi)部開發(fā)的電子氣體調(diào)節(jié)模塊集成在一起，該模塊不僅可以高靈敏度地精確控制O2和CO2水平，而且還可以控制大氣壓力。后者的動(dòng)機(jī)是壓力增加向組織輸送氧氣的能力，以及證明大氣壓力如何改變細(xì)胞生長的研究。同時(shí)建立了支持E7.5后期原腸胚(神經(jīng)板和頭褶階段)生長到后肢形成階段(~E11)的條件，效率很高。
 接下來研究人員發(fā)現(xiàn)，25%DMEM、50%大鼠血清(RS)和25%人臍血清(HCS)的混合物持續(xù)支持胚胎生長，其效率比只使用大鼠血清高得多，并將這種培養(yǎng)基命名為體外培養(yǎng)液(EUCM)。值得注意的是，每24小時(shí)向EUCM補(bǔ)充額外的葡萄糖，直到培養(yǎng)期結(jié)束，對(duì)于克服培養(yǎng)兩天后的發(fā)育異常至關(guān)重要。每24小時(shí)順序增加氧氣水平是最理想的，從E7.5的5%O2開始，E8.5的13%，E9.5的18%，E10.5的21%O2結(jié)束。此外，保持6-7磅/平方英寸的氣壓對(duì)于正常和有效的開發(fā)也是至關(guān)重要的。該方案在培養(yǎng)4天后，在不同小鼠品系中獲得約77%的正常胚胎發(fā)育。4天后，胚胎開始出現(xiàn)異常，卵黃囊循環(huán)中斷，心包積液，并在一夜之間迅速死亡。  綜上，該研究團(tuán)隊(duì)報(bào)告了一種健壯的胚胎培養(yǎng)系統(tǒng)的建立，該系統(tǒng)充分地概括了小鼠在子宮內(nèi)的植入后發(fā)育，從原腸前期發(fā)育到器官發(fā)生的高級(jí)階段，使小鼠胚胎的外部和內(nèi)部操作得以應(yīng)用和監(jiān)測(cè)，最長可達(dá)6天的植入后發(fā)育。將哺乳動(dòng)物胚胎從子宮環(huán)境中移出并在受控條件下正常生長的能力是表征從原腸發(fā)育到器官發(fā)生期間不同擾動(dòng)對(duì)發(fā)育影響的有力工具，可以與遺傳修飾、化學(xué)篩選、組織處理和顯微鏡方法相結(jié)合。這項(xiàng)工作首次證明在哺乳動(dòng)物中，原腸形成和器官發(fā)生的過程可以在培養(yǎng)皿中完全和充分地聯(lián)合重現(xiàn)。后者強(qiáng)調(diào)了胚胎的自組織特性，并為擴(kuò)大來自干細(xì)胞聚集胚胎和不同哺乳動(dòng)物物種的合成胚胎研究奠定了基礎(chǔ)。（生物谷 Bioon） 參考文獻(xiàn)
1、Aguilera-Castrejon A, Oldak B, Shani T, et al. Ex utero mouse embryogenesis from pre-gastrulation to late organogenesis. Nature. 2021 Mar 17. doi: 10.1038/s41586-021-03416-3. Epub ahead of print. PMID: 33731940. 2、Ritchie ME, Phipson B, Wu D, et al. limma powers differential expression analyses for RNA-sequencing and microarray studies. Nucleic Acids Res. 2015 Apr 20;43(7):e47. doi: 10.1093/nar/gkv007. Epub 2015 Jan 20. PMID: 25605792; PMCID: PMC4402510.
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