傳染病疫苗是目前mRNA療法最先進的應(yīng)用。目前臨床前試驗和臨床使用的大多數(shù)mRNA疫苗都采用注射到皮膚、肌肉或皮下的方式，在那里它們被免疫或非免疫細胞吸收并轉(zhuǎn)化為抗原，呈遞給T細胞和B細胞（圖1）。mRNA和載體都能夠增強mRNA疫苗的免疫原性和效力。

（1）注射的mRNA疫苗被抗原呈遞細胞內(nèi)吞。（2）在逃離內(nèi)質(zhì)體進入胞漿后，mRNA被核糖體翻譯成蛋白質(zhì)。翻譯后的抗原蛋白可以通過多種方式刺激免疫系統(tǒng)。（3）胞內(nèi)抗原被蛋白酶體復(fù)合物分解成更小的片段，這些片段通過主要組織相容性復(fù)合物（MHC）I類蛋白在細胞表面顯示給細胞毒性T細胞。（4）活化的細胞毒性T細胞通過分泌細胞溶解分子（如穿孔素和顆粒酶）殺死感染細胞。（5）此外，分泌的抗原可被細胞吸收，在內(nèi)體中降解，并通過MHC II類蛋白在細胞表面呈現(xiàn)給輔助性T細胞。（6）輔助性T細胞通過刺激B細胞產(chǎn)生中和抗體，以及通過炎性細胞因子激活巨噬細胞等吞噬細胞，促進清除循環(huán)病原體。

截至2019年底，已有15種針對傳染病的候選mRNA疫苗進入臨床試驗，但沒有一種進入第三階段試驗（表1），當(dāng)時，人們認為mRNA疫苗至少還需要5-6年才能獲得監(jiān)管部門的批準(zhǔn)。當(dāng)2020年初COVID-19大流行席卷全球時，這些想法就被顛覆了，在接下來的幾個月里，mRNA疫苗的研發(fā)、制造和部署都進入了終極考驗的階段。

表1   針對除COVID-19 以外傳染病的 mRNA 疫苗的臨床試驗

介導(dǎo)進入細胞的表面蛋白通常被mRNA疫苗用于靶向病毒（圖2），例如， SARS-CoV-2的棘突蛋白、流感病毒的血凝素蛋白、塞卡病毒的膜和包膜蛋白（prM-E）、呼吸道合胞病毒（RSV）與人類免疫缺陷病毒（HIV）、埃博拉病毒和狂犬病病毒表面糖蛋白的融合蛋白。此外，利用非表面抗原（如瘧原蟲巨噬細胞遷移抑制因子（PMIF）或惡性瘧原蟲富含谷氨酸蛋白（PfGARP））可以靶向瘧原蟲等復(fù)雜病原體。每種病原體都具有一系列獨特的挑戰(zhàn)，包括高致死率、快速突變、免疫逃避、新菌株和變異等。根據(jù)不同的挑戰(zhàn)，編碼構(gòu)象特異性蛋白質(zhì)、抗原保守區(qū)或單克隆抗體的mRNA疫苗可以為健康成人、兒童、老年人和孕婦提供保護。VAED：疫苗相關(guān)強化疾病。

圖2   在研的mRNA疫苗使用疾病特異性靶向策略保護一系列常見病原體

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大多數(shù)SARS-CoV-2候選疫苗對病毒表面的棘突蛋白產(chǎn)生免疫反應(yīng)。棘突蛋白與其宿主細胞表面的受體血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2結(jié)合。然后，細胞的跨膜絲氨酸蛋白酶2將附著的棘突蛋白切開，該蛋白酶誘導(dǎo)構(gòu)象變化，暴露棘突蛋白的融合肽并促進與細胞或內(nèi)體膜的融合。通常，疫苗mRNA編碼的抗原要么是全長棘突蛋白，要么是棘突蛋白的受體結(jié)合域。

截至2021年6月18日，185個CVID-19疫苗候選處于臨床前開發(fā)階段，另外102個已進入臨床試驗。在臨床試驗中，19種為mRNA疫苗。2020年12月11日，輝瑞的BNT162b2疫苗獲得了FDA的緊急授權(quán)，成為第一個獲準(zhǔn)用于人體的mRNA藥物。一周后，Moderna疫苗mRNA-1273也被授權(quán)在美國使用。最終，它們是第一批在美國、英國、加拿大和其他幾個國家獲得授權(quán)的SARS-CoV-2疫苗。

輝瑞和BioNTech共同開發(fā)了五種mRNA候選疫苗，它們編碼棘突蛋白抗原的變體。兩個主要候選藥物BNT162b1和BNT162b2使用Acuitas Therapeutics的可電離脂質(zhì)ALC-0315和核苷修飾的mRNA，其中所有尿苷被N1甲基假尿苷取代，以增強mRNA翻譯。BNT162b1編碼三聚體分泌型棘突蛋白的受體結(jié)合域，而BNT162b2編碼全長SARS-CoV-2棘突糖蛋白，S2亞基中有兩個脯氨酸替換，將蛋白鎖定在融合前構(gòu)象。

在兩種疫苗的第一階段試驗中，都可誘導(dǎo)高滴度的中和抗體，并產(chǎn)生強烈的CD4 和CD8 反應(yīng)，伴有輕度至中度不良反應(yīng)。兩種候選疫苗耐受性良好且有效，但只有BNT162b2疫苗因其較輕的全身和局部不良反應(yīng)而進入II/III期試驗。在第三階段試驗中，BNT162B2顯示了95%的整體預(yù)防和90～100%的療效。

Moderna與國立衛(wèi)生研究院合作開發(fā)了mRNA-1273。該疫苗使用了可電離脂質(zhì)SM-102制備LNP，該LNP封裝N1甲基假尿苷修飾的mRNA。該序列編碼SARS-CoV-2棘突蛋白，帶有兩個脯氨酸替換，賦予融合前構(gòu)象。

在1期臨床試驗中， mRNA-1273非常有效且耐受性良好。在涉及30420名志愿者的III期試驗中，兩支100μg劑量疫苗的預(yù)防率為94.1%，注射部位的局部疼痛是最常見的副作用。第二次給藥后，一半的志愿者報告了中度至重度系統(tǒng)性副作用（例如疲勞、肌肉疼痛、關(guān)節(jié)疼痛），這些副作用在48小時內(nèi)消失。

盡管輝瑞和Moderna公司生產(chǎn)的疫苗已證明具有良好的療效和安全性，但它們對冷鏈儲存的需求帶來了保障的巨大困難。mRNA-1273可在4-8℃下儲存持續(xù)一個月，而BNT162b2則需要在-60℃條件下儲存。

CureVac的候選疫苗CVnCoV在5℃下可穩(wěn)定儲存3個月。CVnCoV使用Acuitas Therapeutics（可能是ALC-0315）的可電離脂質(zhì)和編碼具有兩個脯氨酸替代物的全長棘突蛋白的未修飾mRNA。在第一階段臨床試驗中，志愿者產(chǎn)生的中和抗體與CVID-19恢復(fù)期患者相似，耐受性良好。然而不幸的是，在包括4萬人的III期臨床試驗中，CVnCoV僅顯示出47%的療效。中期分析表明，CVnCoV的較低療效歸因于新出現(xiàn)的SARS-CoV-2變異。

目前，CureVac正與GSK合作，開發(fā)第二代候選藥物——CV2CoV，該藥物經(jīng)過優(yōu)化，以增強相對于CVnCoV的翻譯和免疫原性。CV2CoV使用來自人類羥基類固醇17-β-脫氫酶4基因的5′UTR和來自人類蛋白酶體20S亞單位β3基因的3′UTR。在臨床前研究中，CV2CoV在體外顯示出比CVnCoV高1.8倍的蛋白表達，并在大鼠中誘導(dǎo)針對B.1.1.7、B.1.1.298和B.1.351變體的高滴度交叉中和抗體。

另一種耐熱候選疫苗ARCoV由中國人民解放軍軍事科學(xué)院與Walvax生物技術(shù)公司合作開發(fā)，可以在25℃穩(wěn)定一周。ARCoV編碼棘突蛋白的受體結(jié)合域。在臨床前研究中，在食蟹猴中可誘導(dǎo)高SARS-CoV-2特異性IgG抗體和強病毒中和滴度。盡管CVnCoV和ARCoV熱穩(wěn)定性背后的原因尚不清楚，但mRNA二級結(jié)構(gòu)、較小的mRNA大小、GC含量和脂質(zhì)可能是重要因素。

其它一些mRNA候選疫苗也正在研制中。LNP-nCoVsaRNA由倫敦帝國理工學(xué)院和Acuitas Therapeutics合作開發(fā)，編碼全長棘突蛋白。目前，正在使用0.1–1μg劑量遞增方案進行I期臨床試驗評估（ISRCTN17072692），其使用了所有候選mRNA疫苗中最低的RNA劑量。

另一種自擴增mRNA疫苗候選物ARCT-021（也稱為LUNAR-COV19）由Arcturus公司利用其專有的LUNAR脂質(zhì)載體和自轉(zhuǎn)錄和復(fù)制RNA（STARR）平臺開發(fā)。它編碼全長融合前棘突蛋白。

流感病毒

全世界每年約有29-65萬人死于流感病毒。目前的疫苗多以促進病毒進入的病毒血凝素蛋白為靶標(biāo)（圖2），然而，該病毒突變迅速，導(dǎo)致抗原漂移，需要每年對疫苗的血凝素抗原成分進行審查和修改。傳統(tǒng)的流感疫苗是生長在雞胚中的滅活流感病毒，其生產(chǎn)時間長，純化困難。此外，病毒會在雞胚中發(fā)生變異，導(dǎo)致疫苗無效。例如，在2016-2017年期間，卵生疫苗中糖基化位點的缺失與疫苗的低效相關(guān)。體外轉(zhuǎn)錄的合成mRNA可以替代抗原靶標(biāo)，并確保在出現(xiàn)全新流感菌株時快速生產(chǎn)疫苗。例如，2013年，基于LNP（DLinDMA）的自擴增mRNA疫苗在中國H7N9疫情爆發(fā)后8天內(nèi)迅速研制成功。但不幸的是，由于當(dāng)時沒有用于mRNA制造的GMP設(shè)施，因此無法進行I期試驗。

也有人致力于研制一種不需要每年修改的通用流感疫苗，這種疫苗可以對幾種流感病毒株和亞型產(chǎn)生免疫力。2012年首次公示的流感mRNA疫苗數(shù)據(jù)表明，三次皮內(nèi)注射80μg?來自PR8H1N1毒株的編碼血凝素的RNActive-mRNA分別誘導(dǎo)了針對H1N1和H5N1毒株的同源和異源免疫，并保護了小鼠免受致死病毒劑量（10×LD₅₀）的傷害。從那時起，針對基于mRNA的流感疫苗的幾種遞送載體（DLinDMA、DOTAP、聚乙烯亞胺和陽離子納米乳劑）、替代mRNA技術(shù)（核苷修飾的mRNA和自擴增的mRNA）和替代抗原靶點進行了評估。

不易發(fā)生突變的血凝素保守區(qū)是一種新的通用疫苗靶點。編碼Cal09 H1N1菌株的保守血凝素區(qū)域、基于基于LNP的mRNA疫苗在小鼠、雪貂和兔子中均產(chǎn)生特異性抗體反應(yīng)，廣泛的保護性抗體賦予小鼠對Cal09H1N1的同源免疫、對PR8 H1N1的異源免疫和對H5N1的異源亞型免疫，并保護它們免受致死毒力的攻擊。另一項研究50?ng劑量的核苷修飾mRNA編碼三種保守的流感蛋白：神經(jīng)氨酸酶、核蛋白和基質(zhì)-2離子通道蛋白以及血凝素柄（圖2），這種微小的mRNA劑量竟出人意料地產(chǎn)生了廣泛的保護性抗體，保護小鼠免受異常大的病毒攻擊（500×LD₅₀）。

在2016年的兩個獨立的I期試驗中，Moderna評估了兩種流感候選疫苗，這些疫苗通過兩次肌肉注射LNP給藥，LNP包裹了表達H10N8和H7N9全長血凝素的核苷修飾mRNA（表1）。結(jié)果表明，兩者都能產(chǎn)生良好的血清轉(zhuǎn)化和血清保護，且不良反應(yīng)僅限于注射部位疼痛、發(fā)紅、肌肉疼痛、關(guān)節(jié)疼痛、頭痛、疲勞和寒戰(zhàn)/普通感冒樣癥狀，這表明疫苗具有良好的安全性和耐受性。

塞卡病毒

塞卡病毒感染于1947年首次被發(fā)現(xiàn)，感染塞卡病毒的患者通常無癥狀或出現(xiàn)發(fā)熱、皮疹和肌肉疼痛等輕微癥狀。然而，塞卡病毒在2015-2016年美洲流行期間演變成為全球健康危機，該病毒可導(dǎo)致嚴重的胎兒神經(jīng)畸形和懷孕期的胎兒死亡。幸運的是，所有塞卡病毒感染都是由單一血清型引起的，這表明接種任何菌株的抗原的疫苗都可以預(yù)防所有塞卡病毒。膜和包膜蛋白（prM-E）是針對塞卡病毒的mRNA疫苗的常見抗原選擇（圖2），因為針對prM-E的中和抗體可以防止病毒融合。

單次30μg或50μg劑量的LNP包裝的核苷修飾的prM-EmRNA疫苗可產(chǎn)生的中和抗體滴度比純化的滅活病毒和DNA疫苗在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)的抗體效價高50-100倍，在恒河猴體內(nèi)比1mgDNA疫苗產(chǎn)生的抗體效價高50倍。值得注意的是，設(shè)計不當(dāng)?shù)娜ú《疽呙鐣黾拥歉餆岵《镜膫魅拘?，登革熱病毒與塞卡病毒屬于同一家族，它們的包膜蛋白具有54-59% 的重疊氨基酸序列。因此，塞卡疫苗編碼的包膜蛋白抗原可能刺激產(chǎn)生與登革熱包膜蛋白交叉反應(yīng)的抗體。在隨后登革熱病毒感染的情況下，可能會發(fā)生抗體依賴性增強反應(yīng)，其中次優(yōu)的塞卡抗體與登革熱病毒結(jié)合。這種結(jié)合會促進病毒進入宿主細胞并加劇登革熱癥狀。Moderna與華盛頓大學(xué)醫(yī)學(xué)院合作提出了一種改良的prM-E mRNA，在E蛋白中包含突變的融合環(huán)表位。兩個10?μg劑量的LNP包裹的修飾mRNA在相隔21天的時間內(nèi)遞送，可保護小鼠免受塞卡病毒攻擊，并減少登革熱增強抗體的產(chǎn)生。

另一項研究使用被動免疫方法，并使用角鯊烯基納米載體遞送編碼中和ZIKV-117單克隆抗體（mAb）的mRNA，在病毒接種前一天或后一天注射一次40μg劑量，可保護免疫受損小鼠免受致死病毒攻擊。使用類似的方法，Moderna在小鼠接種基孔肯雅病毒后4h成功地向小鼠遞送編碼單克隆抗體CHKV-24的mRNA，保護了小鼠免受基孔肯雅病毒誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎。

這些結(jié)果表明編碼中和單克隆抗體的mRNA療法可能具有預(yù)防和治療活性。此外，對于免疫系統(tǒng)受損而無法合成自身抗體的免疫缺陷患者來說，被動免疫是一種很有吸引力的方法。

HIV

艾滋病是由于感染艾滋病毒而導(dǎo)致的一種危及生命的慢性疾病，自1981年發(fā)現(xiàn)以來，尚未找到真正有效且負擔(dān)得起的治療方法，這主要是因為HIV包膜蛋白具有顯著的抗原多樣性和隱藏關(guān)鍵包膜蛋白表位的密集“聚糖屏蔽”。戰(zhàn)勝艾滋病毒是研制mRNA疫苗的一個重要課題，目前，在臨床研究中有幾種用于治療艾滋病的mRNA疫苗。DC遞送系統(tǒng)的體外加載是通常用于癌癥治療的首選遞送方法，在傳染病中，它幾乎完全用于艾滋病的治療研究，并被廣泛證明能安全地引起抗原特異性CD4 和CD8 T細胞免疫應(yīng)答。然而，在2016年，Gandhi等人報告了一項利用轉(zhuǎn)染了編碼HIV-1結(jié)構(gòu)蛋白Gag和Nef的mRNA的自體DC對HIV-1陽性參與者進行免疫的臨床試驗，結(jié)果令人失望。在該試驗中，僅檢測到短暫和微弱的免疫反應(yīng)，表明DC疫苗接種有必要改進。因此，能夠引發(fā)強烈抗原特異性T細胞免疫反應(yīng)的傳遞系統(tǒng)在艾滋病治療中越來越受到重視。

幾項臨床前研究使用多種載體（包括陽離子納米乳劑、DOTAP/DOPE脂質(zhì)體、聚合物和可電離LNP）遞送了編碼HIV蛋白質(zhì)的mRNA疫苗，取得了不同程度的成功。這些研究表明，除了有效的載體外，還需要新的抗原來有效地靶向HIV。

HTI-TriMix 是激活佐劑 TriMix 和選定 mRNA 的組合，該 mRNA 包含來自 HIV-1 結(jié)構(gòu)蛋白（Gag、Pol、Vif 和 Nef）的 16 個保守片段，是一種基于 mRNA 的針對 HIV-1 的新型治療性候選疫苗，編碼強激活信號和有效的 HIV 重組抗原，臨床前結(jié)果表明了成熟 DCs的有效誘導(dǎo)、抗病毒細胞因子分泌（尤其是 IFN-γ）和 T 細胞刺激。結(jié)內(nèi)注射 HTI-TriMix 的小鼠能夠產(chǎn)生強效的抗原特異性細胞毒性 T 細胞反應(yīng)。截至2019年底，HTI-TriMix已完成I期和IIa期臨床試驗。在 IIa 期，感染 HIV-1 的參與者在第 0、2 和 4 周接種了三針疫苗，這些疫苗通過腹股溝淋巴結(jié)超聲引導(dǎo)給藥檢測。盡管 HTI-TriMix 顯示出良好的安全性和耐受性，但不幸的是在 HTI 重組抗原編碼序列上游發(fā)現(xiàn)了一個意想不到的起始密碼子，可能對 HTI 蛋白表達產(chǎn)生負面影響。未來對校正 HTI 的研究尚不確定，考慮到 mRNA 疫苗的額外翻譯過程，體外 mRNA 表達的預(yù)測試值得我們關(guān)注。

由于對艾滋病毒認識有限，發(fā)病機制尚不明確，艾滋病的治療還存在諸多困難。未來 mRNA 疫苗設(shè)計應(yīng)強調(diào)選擇合適的抗原和遞送系統(tǒng)，以引起強烈的抗原特異性 T 細胞免疫反應(yīng)。此外，預(yù)防艾滋病的mRNA疫苗也可能是一個可行的策略。

呼吸道合胞病毒

呼吸道合胞病毒（RSV）是全球急性下呼吸道感染的主要原因，每年約有60000名5歲以下兒童、14000多名65歲以上的人死亡。由于諸多挑戰(zhàn)，40年的疫苗開發(fā)尚未生產(chǎn)出經(jīng)批準(zhǔn)的RSV疫苗。1968年，福爾馬林滅活RSV候選疫苗在兒童中引起了疫苗相關(guān)增強性疾?。?/span>VAED），這一反應(yīng)導(dǎo)致肺部嗜酸性粒細胞和中性粒細胞過度浸潤，導(dǎo)致80%接種疫苗的兒童出現(xiàn)嚴重的毛細支氣管炎或肺炎，并導(dǎo)致兩人死亡。

目前的RSV候選疫苗主要針對高度保守、有助于病毒融合的F蛋白（圖2）。盡管由于中和抗體滴度不足，一些候選疫苗的臨床試驗失敗，但對F蛋白構(gòu)象的新發(fā)現(xiàn)表明，針對融合前構(gòu)象接種疫苗可引發(fā)更好的中和抗體反應(yīng)，這一發(fā)現(xiàn)有望改進未來的疫苗設(shè)計。mRNA疫苗可以通過設(shè)計編碼序列來編碼穩(wěn)定的F蛋白構(gòu)象。在臨床前研究中，使用陽離子納米乳劑和LNP成功遞送了編碼天然RSV F蛋白或穩(wěn)定的融合前構(gòu)象的mRNA疫苗，沒有觀察到任何VAED實例。

埃博拉病毒

埃博拉病毒（EBOV）于1976年首次被確定為導(dǎo)致埃博拉病零星爆發(fā)的病原體，這種病毒性出血熱在50-90%的患者中是致命的，具體取決于病毒株；2014-2016年西非埃博拉疫情，奪走了11000多人的生命。2019年，FDA批準(zhǔn)了一種基于重組水泡性口炎病毒（VSV）的埃博拉疫苗（rVSV-EBOV）。盡管與未接種疫苗相比，rVSV-EBOV在預(yù)防埃博拉傳播方面的有效性為97.5%，但臨床試驗發(fā)現(xiàn)了一些安全問題（例如高劑量導(dǎo)致的急性關(guān)節(jié)炎和皮疹）。抗埃博病毒的mRNA疫苗可能比這種基于病毒的疫苗更安全，因為它們不會在體內(nèi)復(fù)制。一種mRNA疫苗在小鼠中證明了利用聚氨基胺樹狀大分子納米顆粒遞送編碼EBOV糖蛋白（圖2）的未經(jīng)修飾的自擴增mRNA的效力，該疫苗通過CD8 和CD4 T細胞誘導(dǎo)糖蛋白特異性IgG抗體和IFNγ以及IL-2的強烈表達，兩種給藥方案（兩次4?μg劑量或一次40?μg劑量）均能保護小鼠免受致命攻擊。另一項研究用兩次20μg劑量的LNP封裝、核苷修飾的編碼EBOV糖蛋白的mRNA接種豚鼠，誘導(dǎo)了高抗體滴度，同時保護動物免受致命病毒攻擊。

狂犬病病毒

狂犬病是一種人畜共患的病毒性疾病，以神經(jīng)系統(tǒng)癥狀為特征，死亡率接近100%。盡管疫苗已獲得批準(zhǔn)，但每年仍有5萬多人死于狂犬病，這突出了更有效、更廉價的疫苗的重要性。CureVac部署了其RNActive平臺，以在候選狂犬病病毒CV7201中提供編碼狂犬病病毒糖蛋白的未經(jīng)修飾的mRNA（表1）。在一項臨床前研究中，兩劑間隔21天的80μg疫苗可誘導(dǎo)小鼠和豬產(chǎn)生高中和抗體滴度，并誘發(fā)抗原特異性CD4 和CD8 T細胞反應(yīng)。給藥途徑不影響免疫反應(yīng)，但給藥裝置會影響免疫反應(yīng)，只有皮內(nèi)注射器產(chǎn)生了短暫的體液反應(yīng)，這種較弱的給藥效果以及不良事件的高發(fā)生率表明需要進一步優(yōu)化給藥平臺。隨后，CureVac使用AcuitasTherapeutics生產(chǎn)的專有LNP作為其新的狂犬病候選藥物CV7202的遞送工具。在一項臨床前研究中，CV7202提供編碼狂犬病病毒糖蛋白的未經(jīng)修飾的mRNA，并產(chǎn)生強抗體和CD8 和CD4 T細胞反應(yīng)。在非人類靈長類動物中，間隔28天的兩次100μg劑量的疫苗耐受性良好，其抗體滴度比商業(yè)許可的狂犬病疫苗高20倍。I期臨床結(jié)果表明，兩次1μg劑量可產(chǎn)生高中和滴度、強適應(yīng)性免疫反應(yīng)，并且耐受性良好。

巨細胞病毒

編碼巨細胞病毒（CMV）糖蛋白gB和五聚體復(fù)合物（PC）的改良mRNA/LNP疫苗的不同組合在小鼠和食蟹猴體內(nèi)誘導(dǎo)了有效的中和抗體滴度，并且在222天的研究期間，在1、2或3次劑量后，滴度保持良好。在小鼠和獼猴中測得的中和抗體水平與服用人體劑量的Cytogam（臨床上用于CMV預(yù)防的IgG制劑）后達到的水平以及CMV 人類供體血清中測得的水平進行基準(zhǔn)測試，與這些對照組相比，接種疫苗后觀察到更高或相似的抗體滴度和中和作用。

另一種基于自復(fù)制RNA（表達hCMV pp65-IE1）的CMV疫苗（用陽離子納米乳劑（CNE）配制）也在恒河猴體內(nèi)誘導(dǎo)中和抗體和CD4 T細胞反應(yīng)。用已在人體試驗過的mRNA技術(shù)預(yù)防人類CMV疾病的另一種方法是，在體外使用電穿孔將編碼CMV pp65的mRNA 進行自體DC給藥，這會導(dǎo)致pp65特異性T細胞反應(yīng)的誘導(dǎo)或擴增。這種方法也在對HIV-1感染者的多個臨床研究中得到了驗證，通過給自體DC電穿孔的mRNA編碼各種HIV-1抗原來增強HIV-1特異性T細胞免疫。

細菌和寄生蟲

除病毒靶標(biāo)外，自擴增mRNA疫苗已被證明可誘導(dǎo)針對細菌病原體的免疫反應(yīng)，并在小鼠攻擊模型中通過被動和主動免疫提供部分保護。疫苗接種后，保護作用也能轉(zhuǎn)移到新生兒身上，這表明自擴增mRNA疫苗也可能適用于母體免疫方法。

瘧疾是由瘧原蟲屬的單細胞真核寄生蟲引起的，其發(fā)病率和殺傷力位居榜首。由于缺乏表面抗原和瘧原蟲的復(fù)雜生命周期，抗瘧疫苗的生產(chǎn)一直很困難，但對人體對瘧原蟲感染的自然免疫反應(yīng)的研究已經(jīng)確定了潛在的非表面抗原靶點。

例如，瘧原蟲分泌的細胞因子巨噬細胞遷移抑制因子（PMIF）已被證明可以阻止T細胞發(fā)展長期記憶。根據(jù)這一發(fā)現(xiàn)，基于角鯊烯基陽離子納米乳劑制備了一種疫苗，該納米乳劑裝載有編碼PMIF的自擴增mRNA。兩次15μg劑量改善了輔助性T細胞的發(fā)育，并誘發(fā)了抗瘧原蟲IgG抗體和記憶性T細胞反應(yīng)。此外，過繼轉(zhuǎn)移接種小鼠的T細胞可以保護未接種小鼠免受瘧原蟲子孢子的感染。另一項關(guān)于瘧疾感染的機制研究發(fā)現(xiàn)，惡性瘧原蟲富含谷氨酸的蛋白（PfGARP）是一種潛在的mRNA疫苗靶點。

2017年，Maruggi等人設(shè)計了兩種預(yù)防性SAM疫苗，分別與編碼來自A組（GAS）鏈球菌的鏈球菌溶血素-O（SLOdm）和來自B組（GBS）鏈球菌的菌毛2a骨干蛋白（BP-2a）的CNE混合。接種的小鼠成功地產(chǎn)生了大量功能齊全的抗體，這些抗體可通過增強劑顯著增加，并且提高了GAS和GBS感染的存活率。

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