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詳談血細(xì)胞計(jì)數(shù)板使用方法 1 血球計(jì)數(shù)板的構(gòu)造 圖1 血細(xì)胞計(jì)數(shù)板（左）；16×25規(guī)格的計(jì)數(shù)室（右） 2 血球計(jì)數(shù)板的規(guī)格
3 加樣 4 血球計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù) 4.2 用2mm×2mm×0.1mm，16×25或25×16規(guī)格的計(jì)數(shù)室 加樣后，稍待片刻，待細(xì)胞全部沉降到技術(shù)室底部后，將計(jì)數(shù)板放于載物臺(tái)中央，尋找技術(shù)室，取計(jì)數(shù)室的左上、右上、右下、左下4個(gè)中格（即對(duì)應(yīng)圖2中1、4、16、13四個(gè)中格，共計(jì)100個(gè)小格）進(jìn)行計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)重復(fù)3次，算出每個(gè)小格內(nèi)細(xì)胞數(shù)目的平均值。計(jì)算公式為：細(xì)胞個(gè)數(shù)/1mL=每個(gè)小格內(nèi)細(xì)胞數(shù)目的平均值×400×2.5×103×稀釋倍數(shù)；若用2mm×2mm×0.1mm，25×16規(guī)格的計(jì)數(shù)室 ，加樣后，在計(jì)數(shù)室的左上、右上、右下、左下和中部的5個(gè)中格（即對(duì)應(yīng)圖2中1、5、25、21、13五個(gè)中格，共計(jì)80個(gè)小格子）進(jìn)行計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)重復(fù)3次，算出每個(gè)小格內(nèi)細(xì)胞數(shù)目的平均值。計(jì)算公式為：細(xì)胞個(gè)數(shù)/1mL=每個(gè)小方格細(xì)胞數(shù)目的平均值×400×2.5×103×稀釋倍數(shù)（公式推導(dǎo)如圖3） 圖3 1mL內(nèi)細(xì)胞個(gè)數(shù)的推導(dǎo)公式 備注：上述公式推導(dǎo)中，每個(gè)小格內(nèi)細(xì)胞平均數(shù)是指：16×25規(guī)格通過100個(gè)小格計(jì)算出的每個(gè)小格內(nèi)細(xì)胞平均數(shù)；或25×16規(guī)格，通過80個(gè)小格計(jì)算出的每個(gè)小格細(xì)胞平均數(shù)。 5 典型例題 在探究培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量變化的實(shí)驗(yàn)中，利用1mm×1mm×0.1mm，25×16規(guī)格計(jì)數(shù)板對(duì)微生物細(xì)胞進(jìn)行直接計(jì)數(shù)，如下圖。某同學(xué)操作時(shí)將1mL 酵母菌樣品加 99mL無菌水稀釋，用無菌吸管吸取少許使其自行滲入計(jì)數(shù)室，蓋上蓋玻片并用濾紙吸去多余菌液，進(jìn)行觀察計(jì)數(shù)?；卮鹣铝袉栴}： （1）在實(shí)驗(yàn)中，某學(xué)生的部分實(shí)驗(yàn)操作過程是這樣的：①從靜置試管中吸取酵母菌培養(yǎng)液加入計(jì)數(shù)板進(jìn)行計(jì)數(shù)，記錄數(shù)據(jù)；②把酵母菌培養(yǎng)液放置在冰箱中；③第七天再取樣計(jì)數(shù)，記錄數(shù)據(jù)，統(tǒng)計(jì)分析繪成曲線。請(qǐng)指出該同學(xué)實(shí)驗(yàn)操作中的 3 處錯(cuò)誤并改正：①應(yīng)將試管輕輕震蕩幾次再吸取酵母菌培養(yǎng)液進(jìn)行計(jì)數(shù)；②應(yīng)將酵母菌培養(yǎng)液放置在適宜溫度下培養(yǎng)；③應(yīng)連續(xù)七天，每天觀察、取樣計(jì)數(shù)并記錄數(shù)據(jù)。 （2）在實(shí)驗(yàn)前應(yīng)該對(duì)計(jì)數(shù)板、吸管等器具進(jìn)行滅菌處理。 （3）如果一個(gè)小方格內(nèi)酵母菌過多，難以數(shù)清，應(yīng)采取的措施是稀釋處理。 （4）如果觀察到上圖所示 a、b、c、d、e 5 個(gè)中格內(nèi)共有酵母菌 48 個(gè)，則上述 1mL 酵母菌樣品中約有酵母菌2.4×108個(gè)；要獲得較為準(zhǔn)確的數(shù)值，減少誤差，你認(rèn)為該怎么做？多次計(jì)數(shù)，求平均值。 （5）計(jì)數(shù)完畢，取下蓋玻片，用清水將血球計(jì)數(shù)板沖洗干凈， 不能 （填寫 能或不能）用硬物洗刷。 6 血球計(jì)數(shù)板使用注意事項(xiàng) （1）血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法的缺點(diǎn)是不能區(qū)分死菌和活菌，因此計(jì)數(shù)結(jié)果與待測(cè)樣品中實(shí)際含菌數(shù)量相比往往偏高。為了避免把死菌計(jì)數(shù)在內(nèi)，可以對(duì)待測(cè)菌體用臺(tái)盼藍(lán)染色，被染成藍(lán)色的，為死菌。反之，為活菌； （2）應(yīng)將試管輕輕震蕩或倒轉(zhuǎn)幾次再吸取酵母菌培養(yǎng)液進(jìn)行計(jì)數(shù)； （3）若培養(yǎng)一段時(shí)間后而密度過大，計(jì)數(shù)前要進(jìn)行稀釋一定的倍數(shù)； （4）壓在方格線上的細(xì)胞只計(jì)左線和上線的細(xì)胞，目的是防止重復(fù)計(jì)數(shù)； （5）酵母細(xì)胞若有黏連，要數(shù)出團(tuán)塊中的每一個(gè)細(xì)胞； （6）出芽酵母的芽體體積若超過細(xì)胞體積的1/2，則算作獨(dú)立的個(gè)體； （7）計(jì)數(shù)總數(shù)不少于300個(gè)細(xì)胞； （8）計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)不時(shí)地調(diào)節(jié)焦距，才能觀察到不同深度的菌體。 7、更多學(xué)習(xí)資源，請(qǐng)掃描二維碼
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