免疫檢查點阻斷（ICB）治療，尤其是PD-1/PD-L1抑制劑，給很多腫瘤患者帶來了希望[3]。但是臨床試驗顯示，PD-1抑制劑單藥并沒有給HCC患者帶來顯著的臨床收益（臨床試驗注冊號：KEYNOTE-240、CheckMate-459）。

有研究表明，這很大程度上歸因于腫瘤對PD-1抑制劑的耐藥性[4，5]。所以我們迫切需要了解HCC耐藥的機制，并尋找一種有效的聯(lián)合治療策略克服耐藥，改善ICB療法對HCC的療效。

近日，由復旦大學附屬中山醫(yī)院樊嘉院士、柯愛武副研究員、蔡加彬博士領銜的研究團隊在Journal of Hepatology期刊發(fā)表研究成果[6]。

他們發(fā)現(xiàn)對PD-1抑制劑有耐藥性的HCC會上調(diào)表達轉(zhuǎn)錄因子ZFP64，隨后ZFP64被蛋白磷酸化酶Cα（PKCα）活化，從而促進巨噬細胞集落刺激因子1（CSF1）的表達；而CSF1又會招募并促進巨噬細胞極化為促癌的M2表型，導致HCC的免疫逃逸并對PD-1抑制劑產(chǎn)生耐藥。

好消息是，他們發(fā)現(xiàn)使用蛋白激酶抑制劑G？6976或侖伐替尼，可以阻斷PKCα/ZFP64/CSF1軸，恢復HCC對PD-1抑制劑的敏感性。

接下來我們就一起來看看這個研究是如何展開的。

為了尋找對PD-1抑制劑治療耐藥HCC的特征，研究團隊選取了10例接受PD-1抑制劑治療后疾病進展（PD），7例部分應答（PR）的患者肝臟活檢樣本進行了NGS測序。

經(jīng)過分析發(fā)現(xiàn)，ZFP64在疾病進展患者腫瘤組織中顯著上調(diào)表達。在小鼠原位腫瘤模型中，若腫瘤細胞過表達ZFP64，則小鼠腫瘤生長更加迅速，對PD-1抑制劑治療的響應更差。

在驗證隊列中，研究者發(fā)現(xiàn)ZFP64在腫瘤中顯著上調(diào)，并且ZFP64的表達與腫瘤內(nèi)浸潤淋巴細胞的數(shù)量呈反比，ZFP64水平高與患者預后不良相關。這些數(shù)據(jù)提示，ZFP64可能是引起HCC免疫逃逸以及PD-1抑制劑耐藥的關鍵因素。

為了在體內(nèi)環(huán)境探究ZFP64對腫瘤發(fā)生發(fā)展的影響，樊院士團隊使用一種能夠自發(fā)肝細胞癌的HBV轉(zhuǎn)基因小鼠模型。實驗結(jié)果顯示，若使小鼠肝細胞過表達ZFP64，則HCC發(fā)生率、生長速度、轉(zhuǎn)移率都會顯著增加。

對腫瘤微環(huán)境進行分析可見腫瘤中巨噬細胞明顯增多，主要是促癌的M2巨噬細胞；但是，CD4+T以及CD8+T細胞顯著減少。這些數(shù)據(jù)說明，ZFP64可以促進腫瘤的發(fā)生發(fā)展，并且誘導形成免疫抑制性的腫瘤微環(huán)境。

那么ZFP64是如何誘導M2型巨噬細胞增加的呢？

為了解答這個問題，研究者將巨噬細胞與ZFP64hi HCC細胞共培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)這可以促使巨噬細胞上調(diào)表達CD206、CD163 和Arg1等M2巨噬細胞的標志物，同時還會上調(diào)表達免疫抑制細胞因子IL-10和TGF-β1；共培養(yǎng)后的巨噬細胞可以強烈地抑制T細胞增殖與活化。此外，趨化實驗還發(fā)現(xiàn)ZFP64hi HCC促進巨噬細胞的趨化募集。

以上的研究結(jié)果說明ZFP64hi HCC可以通過誘導巨噬細胞M2極化和促進巨噬細胞趨化募集兩種機制，增加腫瘤內(nèi)M2巨噬細胞數(shù)量。

那么ZFP64hi HCC細胞為什么能夠招募并且誘導巨噬細胞M2極化呢？

由于ZFP64是一種轉(zhuǎn)錄因子，那么會不會是它調(diào)控了某種重要的基因表達，以此調(diào)控巨噬細胞呢？

為了證明上述猜測，研究者通過RNA測序以及ChIP-seq技術結(jié)合細胞系實驗，尋找ZFP64的靶基因。最終發(fā)現(xiàn)，ZFP64可以促進CSF1的轉(zhuǎn)錄激活。

研究人員通過共培養(yǎng)實驗發(fā)現(xiàn)，敲低腫瘤細胞的CSF1后，巨噬細胞的Arg1、IL-10和TGF-β1表達水平顯著降低，并且趨化運動也減少。這些數(shù)據(jù)說明，ZFP64通過激活CSF1的轉(zhuǎn)錄，從而促進巨噬細胞的招募與M2極化。

那么ZFP64的活性又是受誰的調(diào)控呢？

接下來研究團隊探究了ZFP64活性的調(diào)控機制，發(fā)現(xiàn)PKCα可以磷酸化ZFP64第226位絲氨酸，從而促進ZFP64核定位與轉(zhuǎn)錄激活能力。因此，PKCα、ZFP64和CSF1組成了一個完整的免疫逃逸信號軸。

對臨床隊列的回顧性研究發(fā)現(xiàn)，HCC患者PKCα/ZFP64/CSF1軸的激活與不良預后相關，并且與PD-1抑制劑治療效果呈現(xiàn)負相關。

既然已經(jīng)知道了以上的機制，那么臨床上該怎么解決PKCα/ZFP64/CSF1軸引起的PD-1抑制劑耐藥問題呢？

研究者嘗試使用PKCα抑制劑G？6976抑制這條信號軸。他們發(fā)現(xiàn)，G？6976單藥治療就可以抑制腫瘤生長，并改善腫瘤免疫微環(huán)境。若是將G？6976與PD-1抑制劑聯(lián)用，則可以取得更好的療效。更為重要的是，研究者發(fā)現(xiàn)使用已經(jīng)批準的多激酶抑制劑侖伐替尼與PD-1抑制劑聯(lián)用，也能顯著地改善治療效果。

既然CSF1是PKCα/ZFP64/CSF1軸的最終效應因子，那么抑制CSF1信號是否能發(fā)揮很好的效果？為了探究這個可能性，研究人員使用CSF1R抑制劑BLZ945對荷瘤小鼠進行治療，發(fā)現(xiàn)單用BLZ945就能很好的抑制腫瘤生長，若將其與PD-1抑制劑聯(lián)用，則可以極大地改善PD-1抑制劑的療效。（生物谷Bioon.com）