分子診斷質(zhì)控品主要有兩大類

1. 臨床來源質(zhì)控品

2. 人工制品：

（1）質(zhì)粒DNA；（2）細(xì)胞系樣品；（3）異種移植腫瘤組織；（4）基因編輯細(xì)胞系

1.

臨床來源質(zhì)控品 

臨床來源質(zhì)控品，也就是患者組織樣本。

臨床來源質(zhì)控品是指經(jīng)診斷明確含有已知靶點基因的臨床活檢或者外科手術(shù)的腫瘤組織。

優(yōu)點

此類質(zhì)控品可以有效的檢測分子檢測全過程，包括：脫蠟-核酸提取-基因擴增-上機測序等實驗過程，確保檢測結(jié)果準(zhǔn)確可信

缺點

難以批量生產(chǎn)，患者組織來源有限；涉及醫(yī)學(xué)倫理問題；腫瘤組織間存在異質(zhì)性，即使是同一患者的同一組織塊，也很難獲得遺傳背景完全相同的組織切片，影響檢測結(jié)果的可重復(fù)性，由于異質(zhì)性的存在，使得組織樣本中的基因突變頻率難以確認(rèn)；再有就是稀有突變樣品難以獲取。

2.

人工制品 

（1）質(zhì)粒DNA

構(gòu)建含有已知基因突變位點的重組質(zhì)粒，將質(zhì)粒與細(xì)胞系基因組DNA混合制備成質(zhì)控品。

優(yōu)點

制備簡單，容易獲得，可以對突變頻率進(jìn)行精確測定。

缺點

質(zhì)粒質(zhì)控品不參與核酸提取過程，不能有效監(jiān)測樣品的核酸提取效率，另外DNA穩(wěn)定性不好，容易受到外界環(huán)境影響而降解。

（2）細(xì)胞系制品

收集攜帶靶基因突變位點的腫瘤細(xì)胞系培養(yǎng)后進(jìn)行石蠟包埋切片，制作成分子檢測陽性質(zhì)控品，收集沒有攜帶突變位點的腫瘤細(xì)胞系石蠟包埋切片，獲得分子檢測陰性質(zhì)控品。相比商品化質(zhì)控品，臨床檢測中的使用成本可以大幅度降低。此類質(zhì)控品也可以確保在NGS檢測FFPE標(biāo)本過程中生成高質(zhì)量測序數(shù)據(jù)。

優(yōu)點

穩(wěn)定性好，易于大批量制備，可以充分模擬臨床樣本的全流程監(jiān)控，可明確基因突變頻率

缺點

稀有基因突變?nèi)匀浑y以獲得；通常一種細(xì)胞系只攜帶一種靶位點突變，因此大Panel檢測質(zhì)控品通常需要將多種細(xì)胞系混在一起。

（3）異種移植腫瘤組織

將攜帶靶位點的腫瘤細(xì)胞系或者患者組織以及不含有靶位點的細(xì)胞系接種到免疫缺陷小鼠，形成異種移植的腫瘤組織，制成FFPE組織樣本，獲得檢測用質(zhì)控品。

優(yōu)點

可以有效模擬人類腫瘤組織的實體瘤結(jié)構(gòu)，有效減少質(zhì)控品和臨床樣本間的基質(zhì)效應(yīng)。

缺點

制備過程繁瑣，難以規(guī)?；慨a(chǎn)；成瘤效果不好把控，重復(fù)性欠佳；若使用患者樣本進(jìn)行接種的話同樣存在倫理問題；稀有基因突變?nèi)匀浑y以獲得。

（4）基因編輯細(xì)胞系

使用CRISPR/Cas9等基因編輯技術(shù)對特定細(xì)胞系的特定位點進(jìn)行改造，引入檢測所需的突變基因型（突變SNV、缺失插入Indel、拷貝數(shù)變異CNV、融合Fusion、重排Rearrangement、易位Translocation），修飾后的細(xì)胞即可作為陽性質(zhì)控品。未進(jìn)行編輯的初始細(xì)胞則可用作陰性質(zhì)控品。

優(yōu)點

具有細(xì)胞系質(zhì)控品的優(yōu)勢：易于批量制備，可監(jiān)控檢測全流程，可以有效解決稀有突變來源有限的問題。另外，基因編輯細(xì)胞和初始細(xì)胞除了靶位點外，遺傳背景完全相同，在NGS數(shù)據(jù)分析時，可以更好區(qū)分突變基因是胚系突變還是體系突變。是NGS檢測中的理想質(zhì)控品。

缺點

基因編輯技術(shù)復(fù)雜，制作周期較長，一般需要由基因編輯專業(yè)公司進(jìn)行。