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      對(duì)一例胃液隱血試驗(yàn)假陰性的分析

       基層檢驗(yàn)網(wǎng) 2024-07-23 發(fā)布于重慶

      案例

      某天在日常工作中收到一例胃液標(biāo)本,鏡下下圖所示:

      圓形、褐色、折光性差的為何物?紅細(xì)胞?影紅細(xì)胞?雜質(zhì)?我看著像是被破壞的紅細(xì)胞,經(jīng)與同事們討論之后大家一致認(rèn)為是紅細(xì)胞,翻來檢驗(yàn)圖譜經(jīng)過查證確為紅細(xì)胞,如下圖所示:

      膠體金法檢測隱血為陰性。如果鏡下真是紅細(xì)胞的話,為啥隱血試驗(yàn)是陰性的?如果按隱血陰性報(bào)告的話,會(huì)嚴(yán)重影響臨床對(duì)疾病的判斷?

      為什么鏡下如此多的紅細(xì)胞,隱血試驗(yàn)會(huì)是陰性呢?我們先從影響抗原抗體反應(yīng)的因素說起吧。一是自身因素,抗體的濃度、特異性、親和性,抗原表位的種類數(shù)目都影響反應(yīng)結(jié)果。二是環(huán)境因素,電解質(zhì)、酸堿度、溫度。這么多的紅細(xì)胞,會(huì)不會(huì)是帶現(xiàn)象,也就是抗原量太大引起的,隨即又用生理鹽水稀釋來檢測,得到的還是陰性結(jié)果:

      眾所周知,膠體金單克隆抗體法靈敏度高、特異性強(qiáng),那就考慮是環(huán)境因素引起的。抗原抗體最適溫度15-40度,最適PH值6-9,用0.9%生理鹽水做為稀釋液,而正常胃液的PH值為0.9-1.8,考慮是PH值影響了檢測結(jié)果。

      將胃液的PH值用氫氧化鈉調(diào)到7,復(fù)測得到結(jié)果如下:

      還是陰性,想了一下,檢測Hb還有一種方法,那就是試帶法,隨即把胃液離心取上清加鹽水用干化學(xué)法(四甲基聯(lián)苯胺法)進(jìn)行復(fù)查,隱血3+,和鏡下的大量紅細(xì)胞完全契合。結(jié)果如下:

      可算是把血紅蛋白檢測出來了,不過這也是浪費(fèi)了太多的試劑了吧,不要緊,我們有高招,那就是它

      此試劑為酶免法檢測的底物液,底物液A的成分為過氧化氫,底物液B的成分為四甲基聯(lián)苯胺,如果胃液中存在Hb,Hb中的亞鐵血紅素具有過氧化物酶活性,催化過氧化氫,釋放出新生態(tài)氧,把受體四甲基聯(lián)苯胺氧化成四甲基聯(lián)苯胺藍(lán),顯示藍(lán)色。顯色的深淺反映了血紅蛋白的多少,即出血量的多少。如下圖所示,左側(cè)鹽水對(duì)照,右側(cè)為本實(shí)驗(yàn):

      結(jié)

      膠體金法檢測嘔吐物最適pH值為7~8。pH過低Hb的抗原結(jié)合位點(diǎn)構(gòu)象改變,患者血紅蛋白的抗原與單克隆抗體不匹配,可引起假陰性,Hb在胃內(nèi)停留時(shí)間過長被胃酸或在腸道中被蛋白酶降解,喪失免疫活性,Hb抗原決定簇會(huì)被降解或屏蔽,也可引起假陰性。當(dāng)Hb濃度大于2000μg/ml時(shí),抗原抗體比例不合適也可導(dǎo)致假陰性。

      化學(xué)法檢測Hb極為敏感,靈敏度較低,進(jìn)食動(dòng)物血液、鐵劑、鉍劑等氧化劑可造成假陽性。高濃度的維生素C可造成假陰性。膠體金特異性較高,化學(xué)法靈敏度較低,當(dāng)兩種檢測結(jié)果不一致時(shí),應(yīng)結(jié)合患者的臨床癥狀、體征病史和其他實(shí)驗(yàn)室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。

      作者:陳紅芳  蘇勇霏  趙虎 (河北省新樂市醫(yī)院檢驗(yàn)科)

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