體外診斷儀器能夠提供定量和定性的生理分析物的結(jié)果,常用的體外診斷儀器包括生化分析儀、化學發(fā)光免疫分析儀、血細胞分析儀、凝血分析儀、尿干化學分析儀、尿有形成分分析儀、血糖儀、流式細胞儀分析儀等。

產(chǎn)品技術要求中的性能指標是指可進行客觀判定的成品的功能性、安全性指標以及質(zhì)量控制相關的其他指標。

產(chǎn)品設計開發(fā)中的評價性內(nèi)容(例如生物相容性評價)原則上不在產(chǎn)品技術要求中制定。

產(chǎn)品技術要求中性能指標的制定應參考相關國家標準/行業(yè)標準并結(jié)合具體產(chǎn)品的設計特性、預期用途和質(zhì)量控制水平,并且不應低于產(chǎn)品適用的強制性國家標準/行業(yè)標準。

以下介紹幾種常見的體外診斷儀器性能指標

全自動生化分析儀性能指標主要包括雜散光,吸光度線性范圍,吸光度準確度,吸光度穩(wěn)定性,吸光度重復性,溫度準確度與波動度,樣品攜帶污染率,加樣準確度與重復性,臨床項目的批內(nèi)精密度,其他指標如分析效率和臨床適用性。

用蒸餾水作參比,在340mm波長處測定50gL亞硝酸鈉校準溶液的吸光度;也可用空氣作參比,在340nm處測定JB400型截止型濾光片(cut- -off filte)的吸光度,其值應當不小于2.3。

對分析儀在340mm或者是450~520m波長范圍內(nèi)的任一波長進行線性范圍測定,將橘紅G色素原液稀釋成11個濃度梯度,并在每個濃度下測定5次,計算平均吸光度。

以稀釋比例為橫坐標,吸光度平均值作為縱坐標,畫散點圖。首先用最小二乘法對前4個點進行線性擬合,再計算5-11點的相對偏移。

其中吸光度的線性范圍應當不小于2.0,各測定值的相對偏移在5%以內(nèi)。

以蒸餾水作空白,并于340m波長處重復測定3次重鉻酸鉀標準溶液,計算3次測量值的平均值與標準值的差。

吸光度為0.5的重鉻酸鉀的允許誤差為0.025,吸光度為1的重鉻酸鉀的允許誤差為0.07。

測定340m和600-700m波長范圍內(nèi)的任一波長下的吸光度穩(wěn)定性。

以吸光度為0.5的重鉻酸鉀或者硫酸銅標準溶液作為樣本和試劑,將儀器的標本量和試劑量均設為最小量,

反應時間設為最長反應時間,讀數(shù)間隔為儀器的測定周期,并測定上述溶液的吸光度,計算其最大與最小值之差,其值應小于等于0.01.

以在340m波長處的吸光度為0.5的重鉻酸鉀標準溶液同時作為標本和試劑,加入量為分析儀的最小反應體積,反應時間為分析儀的最長反應時間,并連續(xù)測定20次,計算其吸光度的變異系數(shù)CV,應當滿足CV≤1.5%.

用高精度的測溫儀連續(xù)測定比色杯中的去離子水的溫度20次,計算平均溫度與溫度波動度(最大測定值減去最小測定值),其中平均溫度應當在設定值的±03℃以內(nèi),波動度應當在±0.2℃以內(nèi)。

用人源血清溶解適量橘紅G,配置340m波長處吸光度為200的橘紅G原液;將橘紅G原液準確稀釋200倍,

在分析儀上測定稀釋液在340m波長處相對于蒸餾水的吸光度,重復測定20次,計算20次吸光度的平均值,乘以稀釋倍數(shù),即為橘紅G原液的理論吸光度:

以蒸餾水為試劑,以橘紅G原液和蒸餾水作為樣品,樣品的加入量為分析儀標稱的最大樣品量,按照原液、原液、原液、蒸餾水、蒸餾水、蒸餾水的順序為一組、在分析儀上測定上述樣品反應結(jié)束時的吸光度,共進行5組測定。

通過這5組吸光度的變化趨勢計算樣品攜帶污染率。樣品攜帶污染率應不大于5%。

采用稱量法檢測。在恒溫恒濕的條件下,用最小稱量顯示值為0.01mg的電子天平,重復稱量試劑針或樣本針加入的某一體積的蒸餾水20次。

計算加樣誤差:加樣誤差=(實際加入量一規(guī)定加入量)/規(guī)定加入量×100%。加樣的準確度誤差應當不超過±5%,變異系數(shù)不超過±2%。

采用兩個水平的質(zhì)控血清,按照不同檢測項目不同的要求檢測,測定并計算不同項目檢測結(jié)果的平均值、SD、CV,應當滿足相應的要求.

是指單位時間內(nèi)完成的測試總數(shù),用測試/小時來表示。分析效率與加樣周期長短和測試循環(huán)有關。

其中,加樣周期是指樣本針從采集前一個標本開始到采集下一個標本開始所需要的時間,加樣周期越短,分析速度越快。

測試循環(huán)是指反應杯從這一次使用開始到下一次使用時所需的時間,這個循環(huán)與總反應時間相關,一個項目的總反應時間越短,則其分析速度也就越快.

影響生化分析儀的臨床適用性的因素很多,包括波長范圍及個數(shù)、樣本盤或樣本架的樣本位、樣本量、樣本液面?zhèn)鞲衅?、樣本的預稀釋、試劑盤和試劑位試劑量試劑瓶容量、試劑儲存溫度、試劑液面?zhèn)鞲衅?、反應杯型式、反應杯光徑、反應杯個數(shù)、反應時間、反應液量、自動沖洗及攪拌系統(tǒng)、用水量、開放程度、急診功能、復查功能、軟件的交互性等

全自動發(fā)光免疫分析儀行業(yè)標準中的性能指標主要包括反應區(qū)溫度控制的準確性和波動度,分析儀穩(wěn)定性,批內(nèi)測量重復性,線性相關性,攜帶污染率等。

將精度不低于0.1℃的溫度檢測儀的探頭,或分析儀生產(chǎn)企業(yè)提供的相同精度、且經(jīng)過標定的專用測溫工裝,放置于生產(chǎn)企業(yè)制定的位置,在溫度顯示穩(wěn)定后,每隔30秒測定一次溫度值,測定時間為10分鐘,計算所有溫度值的平均值和最大值與最小值之差。平均值與設定溫度值之差為溫度準確度,最大值與最小值之差為溫度波動。 溫度準確性應在設定值的 士0.5℃內(nèi),波動度不超過 1.0℃。

待分析儀開機處于穩(wěn)定工作狀態(tài)時,用生產(chǎn)企業(yè)制定的臨床測試項目的校準品、試劑,上機測試相應質(zhì)控品或新鮮病人樣本,重復測試3次,計算測定結(jié)果的平均值,過4小時,8小時后分別再上機重復測試3次,計算測定結(jié)果的平均值,以第1次的測試結(jié)果作為基準值,測試結(jié)果的相對偏移不超 士 10%。

用生產(chǎn)企業(yè)制定的臨床測試項目的校準品、試劑,上機測試相應質(zhì)控品或新鮮病人樣本,重復測試20次,其變異系數(shù)CV≤8%。

用生產(chǎn)企業(yè)制定的臨床測試項目的試劑,并準備濃度比不小于2個數(shù)量級的線性上線樣品和線性下限樣品

用線性下限樣品將線性上限樣品按比例稀釋成至少5個不同濃度的樣品,混合均勻后將各個濃度的樣品分別重復測定3次

計算三次測量值的均勻值,以稀釋濃度為自變量,以測定結(jié)果均值為因變量求出線性回歸系數(shù),線性相關系數(shù)(r)≥0.99。

生產(chǎn)企業(yè)應指定臨床測試項目,準備該臨床測試項目的高濃度樣品,使用生產(chǎn)企業(yè)指定的臨床測試項目的試劑,以高濃度樣品和零濃度樣品作為樣品,

按照高濃度樣品、高濃度樣品、高濃度樣品、零濃度樣品、零濃度樣品,零濃度樣品的順序為一組,在分析儀上進行測定,共進行5組測定,通過這5組測定值的變化趨勢計算樣品攜帶污染率。攜帶污染率≤10^-5.

血細胞分析儀的性能指標主要包括空白計數(shù)、線性、精密度、準確度、攜帶污染率、白細胞分類準確性等。

主要驗證項目包括:白細胞數(shù)目(WBC)、紅細胞數(shù)目(RBC )血紅蛋百濃度( HGB )血小板數(shù)目 ( PLT),HCT,平均紅細胞體積(MCH).

用稀釋液作為樣本在分析儀上連續(xù)進行三次測試,取三次測試結(jié)果中的最大值。

應當滿足以下求:WBC<0.5x10⁹/L;RBC<0.05x10¹²/L;HGB<2g/L;PLT<10x10⁹/L

線性驗證時,可以使用商業(yè)化的線性質(zhì)控品,也可以使用高值樣本。

當使用高值樣本時,取抗凝全血,離心去血漿,使之成濃縮的血細胞,冉將濃縮的血細胞用自身的泛血小板血漿/稀釋液進行梯度稀釋,至少稀釋為5個濃度,使高濃度值接近線性范圍上限,使低濃度值接近線性范圍的下限。

以各濃度梯度的血樣品上機測定,每份標本測定3次,各取測量平均值。

 然后以稀釋的倍數(shù)為X軸,測量值的平均值為 Y軸,作散點圖,計算回歸方程。 并由回歸方程求出各稀釋濃度點對應的理論值,計算測量平均值與理論值的偏移。 血細胞分析儀線性要求見下表。

取規(guī)定范圍內(nèi)的1份樣本，按常規(guī)方法重復測定10次，計算平均值，標準偏差，以及變異系數(shù)。精密度要求應滿足下表。

按照血液分析儀的操作說明書進行系統(tǒng)校準后,以參考方法賦值的新鮮血為樣本,測定3次,分別計算相對偏差,如果3次結(jié)果都符合要求,即判為合格。

如果大于等于2次的結(jié)果不符合,即判為不合格。如果有1次結(jié)果不符合要求,則應重新連續(xù)測試20次,并分別計算相對偏差,如果大于等于19次測試的結(jié)果符合要求,則準確度符合要求。

準確度的允許偏移范圍為:WBC≤±5.0%,RBC≤±2.0%,HGB≤±2.0%,PLT≤<±9.0%,HCT/MCV≤±2.0%。

取一份高濃度的臨床樣本,混合均勻后連續(xù)測定3次,再取一份低濃度的臨床

樣本,混合均勻后連續(xù)測定3次,按以下公式計算攜帶污染率:攜帶污染率=|L1-L3|/H3-L3。L1為低濃度臨床樣本的第一次測定值,L3為低濃度臨床樣本的第三次測定值,H3為高濃度臨床樣本的第三次測定值。

攜帶污染率應當滿足以下要求:WBC≤1.5%; RBC≤1.0%;HGB≤1.0%;PLT≤3.0%。

取20份正常樣本,每份正常樣本分為2份,分別用于參考方法和儀器法的測試。 儀器法應對20份樣本進行雙份測定。

按照99%可信區(qū)間計算方法,得到參考方法結(jié)果的可信范圍。 將儀器法測量結(jié)果平均值與可信范圍比較,≥99%可信范圍下限或≤99%可信范圍上限的判定為合格,超出此范圍的判定為不合格。

凝血分析儀的主要性能指標包括預溫時間、溫度控制、攜帶污染率、測試速度、測量重復性、測量準確度、線性、連續(xù)工作時間等。

主要驗證項目包括: 纖維蛋白原(FIB)凝血酶原時間(PT)活化部分凝血活酶時間(APTT)凝血酶時間(TT).

開機預溫時間應不超過30分鐘。

檢測部和溫育恒溫裝置部的反應體系溫度控制在37℃ ±1.0℃范圍內(nèi)。

采用對倍稀釋的血漿連續(xù)測定三次后,立即連續(xù)測定原濃度血漿三次,再連續(xù)測定對倍稀釋的血漿三次，計算FIB攜帶污染率

檢測1小時內(nèi)單個項目的測試數(shù)，測試速度或恒定測試速度應不小于儀器說明書標稱的測試速度。

采用全自動凝血分析儀配套的試劑、質(zhì)控品及響應的測定程序，檢測不同的項目，每個項目重復測定10次，計算平均值，標準差，以及變異系數(shù)CV。應當滿足下表。

使用FIB的定值血漿，連續(xù)測定3次，計酸平均值。其應當滿足相對偏移不超過±10%。

測試FIB5個濃度水平(涵蓋高 中 低水平) 計算相關系數(shù),FIB的線性范圍必須達到儀器標稱的要求,r≥0.975。

開機后測質(zhì)控血漿的PT,APTT, FIB.TT各三次,求各自平均值,將全自動凝血分析儀連續(xù)保持開機或待機狀態(tài)24小時，再次測定PT,APTT, FIB.TT各三次，求平均值，兩次測定結(jié)果均應在質(zhì)控血漿規(guī)定的范圍內(nèi)。

流式細胞儀的性能指標主要包括熒光靈敏度.熒光線性前角度散射光檢測靈敏度、儀器分辨率、前向角散射光和側(cè)向角散色光分辨率、倍體分析線性、表面標志物檢測準確性、表面標記物檢測的重復性、攜帶污染率、儀器穩(wěn)定性等。

在裝有1ml鞘液的試管中加入話量的標準微球,并充分混勻后上機進行試驗,

可對電壓設置值進行調(diào)節(jié),確保所有的峰信都可以在直方圖上識別和分布。

在裝有1ml鞘液的試管中加人適量的標準微球,并充分混勻后上機進行試驗,流

式細胞儀運用直方圖對試驗結(jié)果進行分析,得到各個峰的平均熒光強度;

根據(jù)標準微球說明書提供的各個峰的MESF數(shù),以及分析得到的各個峰的平均熒光強度,以MESF數(shù)(y)和平均熒光強度(x)的線性回歸,計算相關系數(shù)(r)。流式細胞儀熒光強度的線性相關系數(shù)(r)應當不低于0.98。

在裝有1ml鞘液的試管中加入適量直徑不大于1pm 的標準微球,并充分混勻后上機進行檢測,檢查直方圖上顯示的峰值信號,以及顯示峰值信號的標準微球直徑。 流式細胞儀前向角散射光檢測靈敏度應當不大于1um。

在裝有1ml經(jīng)過0.2um濾膜過濾的磷酸鹽緩沖液的試管中加入廠家提供的標準微球, 并充分混勻后上機進行試驗。 重復測試 10次,利用直方圖分析試驗結(jié)果。

流式細胞儀前向角散射光和熒光信號的熒光通道全峰寬或半峰寬 CV值應不大于2%。

在裝有1ml鞘液的試管中加人5ul枸椽酸鈉抗凝全血,混勻后并上機檢測,檢查前向角散射光和側(cè)向角散射光點圖是否可以將血小板和紅細胞

分開。

使用經(jīng)過熒光染色的標準細胞株或者標準細胞核,上機檢測G0/G1期及G2/M期的平均熒光強度,并計算兩個平均熒光強度的比值。

流式細胞儀進行二倍體細胞周期分析時,G2/M與G0/G1的平均熒光強度比值應當在1.95~2.05。

使用已標記好CD3,CD4,CD8的質(zhì)控細胞,上機測試,分別重復測定5次,依次記錄每次檢測的CD4和CD8,CD3陽性值的百分比,分別計算平均值。

流式細胸儀檢測質(zhì)控血時,淋巴細胞表面表達的CD3,CD4和CD8陽性百分比結(jié)果應在給定范圍內(nèi)。

使用巴標記好CD3,CD4,CD8印質(zhì)控細胞,上機測試。分別重復測定20次,分別計算 CD4和CD8,CD3陽性百分比的變異系數(shù)(CV) 重復檢測樣樣品CD3、CD4、CD8陽性百分比結(jié)果的變異系數(shù)應不大于10%。

首先使用標準微球上機進行測試,連續(xù)測試3次,計算標定區(qū)域的顆粒數(shù),分別記為H1-1、H1-2、H1-3;進行一次樣品管反沖循環(huán)后,再進行空白數(shù)量測試,連續(xù)測試3次,計算標定區(qū)域的顆粒數(shù),分別記為L1-1,L1-2,L1-3;按照此程序循環(huán)3次,再計算攜帶污染率值(Ci),取最大值。

將周圍環(huán)境溫度控制在允許范圍內(nèi),取一支試管加入1ml經(jīng)過0.2μm 濾膜過濾的磷酸鹽緩沖液和適量經(jīng)過振蕩混勻的標準微球,并充分混勻后上機進行試驗

測試完成后,利用直方圖分析試驗結(jié)果,計算標準微球的平均熒光強度值(FL1);連續(xù)開機8小時后,在相同流式細胞儀設置和熒光道數(shù)的條件下重復前述試驗步驟,得到標準微球的平均熒光強度值(FL2),按以下公式計算FL1,FL,的偏差值(B)。

當環(huán)境溫度的變化不超過設定溫度5%時,在8小時內(nèi)檢測前向散射光(forward scatter,FSC)及所有熒光通道(FL1,FL2,FL3及FL4)峰值熒光道數(shù)的波動范圍應當不超過±10%。

END

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